文档介绍：大丽轮枝菌基因敲除体系的建立及分泌蛋白初步分析博士研究生:田李指导教师:戴小枫研究员申请学位类别:理学博士业:生物化学与分子生物学研究方向:病原茵与寄主互作培养单位:作物科学研究所中国农业科学院研究生院专提交日期月号:
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导师签名;名擘!R时间:叫年多月即日时吻年醇阃:训年毛其軧论文作者签名:\留各关于论文使用授权的声明厂夕日独创性声明勿月C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:学院有权保留送交论文的复印件和磁盘。允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。。
‘\‘\.僦黼翮粉籼蛄马夸译蟛各彩柳少鲍生中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表博导论文作者专业研究方向指导教师培养单位芯克⒅行硕单位论文题目姓名职称签名博导日博导囱博导曰大丽轮枝菌基因敲除体系的建立及分泌蛋白初步分析生物化学与李病原菌与寄主互作分子生物学戴小枫研究员作物科学研究所朱玉贤教授北京大学生命科学学院李有志研究员硕导口/,
摘要大丽轮枝菌是引起棉花黄萎病的病原菌,在世界范围内造成重大经济损失。已有研究表明大丽轮枝菌的分泌蛋白即毒素蛋白是造成棉花黄萎、落叶和减产的主要因素之一。因此构建大丽轮枝菌基因敲除体系笛槠教和分泌蛋白预测体系镄畔⑵教,并在此基础上对潜在的毒性分泌蛋白和分泌系统蛋白的编码基因进行功能研究,将为揭示大丽轮枝菌致病机理,寻找防治黄萎病的生物学靶点提供思路。构建了高效的大丽轮枝菌基因敲除体系。具体从以下几方面进行了体系的优化:诤螾和际跸嘟岷细咝Ч菇ɑ蚯贸靥澹利用农杆菌介导法转化大丽轮枝菌;用在浼尤胫滤阑騂的双元载体,使婊迦胱;,从而通过“反向筛选”提高基因敲除的效率。使用上述平台对大丽轮枝菌腺嘌呤合成酶基因和几丁质合成酶基因进行基因敲除验证,基因敲除转化子在总转化子中的比例分别达到%和%。建立了预测大丽轮枝菌基因组范围内所有分泌蛋白的计算方法。⒀砑、、猵和屑扑悖げ獾玫絍蜃槟诠灿个分泌蛋白。利用上述分泌蛋白的预测方法,在本实验室两株不同致病性生理型弱毒性蚔慷拘基因组全测序的基础上,进行比较分析后,得到銮慷玖闢特有的分泌蛋白基因,推测它们可能在强致病性菌株闹虏』浦蟹⒒恿酥匾W饔谩NQ橹て渖镅Чδ埽ü疚囊呀⒌大丽轮枝菌基因敲除体系,分别得到了上述龅鞍妆嗦牖蛟赩中缺失的突变体菌株。但是表型分析发现,鐾槐涮寰晡蘼鄞由に俾剩吡亢椭虏⌒苑矫娑加胍吧途闢没有明显的变化。其原因可能是由于大丽轮枝菌分泌的诸多毒性蛋白可能共同参与了生物学毒性的产生,缺失一个在功能上冗余的分泌蛋白基因后,不会产生容易识别的表型改变。这一初步结果暗示,较难找到单一的分泌蛋白基因做为防治黄萎病的生物学靶点。谥释鳫家族成员鞍捉昀幢环⑾衷诘疚敛【鞍追置中扮演了重要的角色。本研究在锌寺×似渫椿騐。缺失拇罄雎种突变体菌株姆置诘鞍鬃芰拷鲇幸吧蚔的%,并且几乎丧失了对寄主植物军棉诺那秩灸芰ΑR虼朔置谙低车鞍譜可调控大丽轮枝菌多种蛋白的分泌,在大丽轮枝茵的致病性中起了重要作用。这一初步研究和发现,为防治棉花黄萎病提供了一个潜在的生物学靶点。关键词:大丽轮枝菌,基因敲除,分泌蛋白,分泌系统蛋白/
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目录第一章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.大丽轮枝菌分泌蛋白致病性研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..鞍字首檠а芯糠椒ā.üδ芑蜃檠а芯糠椒ā真菌基因敲除研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。.