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为了提高地衣芽抱杆菌A2(BacilluslicheniformisA2)发酵液的活菌含量,采用
Hackett-Burman设计法和响应面分析法对其发酵培养基进行优化。先用Plackett-Burman
设计从8种原料中筛选出对活菌含量有显著影响的因素,再用最陡爬坡试验及Box-behnken设计进一步优化。
结果表明,MgSO4・7H2O、酵母粉和尿素是影响发酵液活菌含量的显著因素,优化后的培养基为:可溶性淀粉5g/L,,K2HPO46g/L,KH?PO/g/L,MnSO4",MgSO4",豆粕10g/。
在此条件下,
。
酵母菌的培养
大多数酵母菌为腐生,,常见于含糖分较高的环境中,例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速,易于分离培养,在液体培养基中,酵母菌比霉菌生长得快。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点,常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液(这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长),然后在固体培养基上用划线法分离之。
常用的培养基有:
(一)麦芽汁培养基的配制
培养基成分
新鲜麦芽汁,一般为10-15波林。
配制方法
用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡6-12h,置于15°C阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒的两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。
取一份麦芽粉加四份水,在65C水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(,加2滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。
糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20ml,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)。
用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到10-15波林,。
如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花的新鲜麦芽汁,加水稀释到10-15波林后使用。
如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂,加热融化,补充失水。
分装、加塞、包扎。
高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
(二)马铃薯葡萄糖培养基的配制
1、培养基成分
马铃薯
20g
葡萄糖
2g
琼脂
-2g
水
100ml
自然pH

⑴配制20%马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g,切成小块,加水1000m1。80°C浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积。100Pa灭菌20min。即成20%马铃薯浸汁,贮存备用。
配制时,按每100m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖,加热煮沸后加入2g琼脂,继续加热融化并补足失水。
分装、加塞、包扎。
高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
(三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制

黄豆芽
10g
葡萄糖
5g
琼脂
-2g
水
100ml
自然pH

称新鲜黄豆芽10g,置于烧杯中,再加入100ml水,小火煮沸30min,用纱布过滤,补足失水,即制成10%豆芽汁。
配制时,按每100ml10%豆芽汁加入5g葡萄糖,煮沸后加入2g琼脂,继续加热融化,补足失水。
分装、加塞、包扎。
高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
(四)察氏(czapck)培养基的配制
1.
培养基成分
蔗糖
3g
NaN03

K2HPO4

KCl

MgS04・7H20

FeS04

琼脂
-2g
蒸馏水
100ml
自然pH
2.
配制方法
称量及溶化量取所需水量约2/3左右加入到烧杯中,分别称取蔗糖、NaN03、
K2HP04、KCl、MgS04。依次逐一加入水中溶解。%的FeS04溶液。
定容候药品全部溶解后,将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。
加琼脂加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。
分装、加塞、包扎。
高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
(五)YPD培养基
YPD或YPED,:YeastExtractPeptoneDextroseMedium(1L),又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基,用于酵母菌的培养。
1、配方:1%YeastExtract(酵母膏),2%Peptone(蛋白胨),2%Dextrose(glucose)
(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉
2、配制方法:
(1) 溶解10gYeastExtract(酵母膏),20gPeptone(蛋白胨)于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉
(2) 高压121度20min
(3) 加入100mllOXDextrose(glucose)(葡萄糖),(葡糖糖溶液灭菌后加入)注:葡萄糖,yeastextract,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应,导致
培养基成分变化,所以要分别灭菌后再混合。
YPEG:除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外,其他成分同YPD。