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阉毯善訇登孝日期:≯’『月玛同学位论文原创性声明年学位论文使用授权声明期:本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者;本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根掘郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文壹接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者:。
水解酶基因诒廾ǔざ鹊骺刂械淖饔摘要杜氏盐藻是一种高度耐盐的单细胞真核藻类,生长条件要求简单,容易培养,具有一对等长的鞭毛,长度大约左右,结构为典型的“结构【浚经过简单处理鞭毛可发生再生和重吸收【俊1廾ǖ男翁浠诠饩迪***菀坠鄄欤非常适合作为研究鞭毛结构组装的模式生物。鞭毛是一种在多种细胞表面广泛存在的细胞器,参与细胞信号转导、细胞周期调控、细胞运动等,对维持细胞生命活动至关重要【俊1廾ń峁购偷骺匾斐与多种疾病的发生密切相关,如多囊肾、综合症等。因此研究鞭毛的调控机制对解决这些疾病的发生有重要意义【俊1廾ǖ淖樽暗骺鼗颇壳把芯炕比较初级,具体的过程尚不明了。现有研究显示鞭毛的组装是一个双向的过程,既正向运输与逆向运输同时进行。帕W魑T耸涮澹廾樽八“保渤莆;跷铮诙Φ鞍譳驱动下,沿微管蛋白运送至鞭毛顶端,在顶端卸下货物,组装微管。帕T诒廾ǘザ俗O颍⒐芙饩鄣牟物,在动力蛋白的驱动下沿微管返回鞭毛基部【俊1廾ǖ某ざ鹊骺刂饕包括再生和重吸收。当鞭毛的正向运输速率大于逆向运输速率时,鞭毛长度增长,即为鞭毛再生。当逆向运输速率大于正向运输速率时,鞭毛趋向于解聚,长度发生缩短,即为鞭毛重吸收。在细胞分裂过程中,鞭毛会发生周期性的再生与重吸收,鞭毛长度的变化可能是细胞周期调控的信号【俊M痹谝恍┘膊≈校也会观察到鞭毛的长度异常。佘崭甙腚装彼崴饷是真核生物***化途径中的关键酶,催化***转移反应的产物幌佘崭甙腚装彼崴馍筛甙腚装彼嵊胂佘眨种其活性可问接抑制***转移酶活性,进而抑制***化作用【证实在莱茵衣藻鞭毛重吸收过程中蛋白***化通路被激活【】,但目前关于
攀涎卧逶逯辍⒕钟朐靥材料与方法诒廾ǔざ鹊骺刂惺欠裼幸欢ǖ淖饔茫形薅邸为研究作为鞭毛组分之一的欠癫斡氡廾ǔざ鹊骺兀狙芯垦∮杜氏盐藻作为模式生物,通过对多个物种鞍妆J匦蛄薪斜榷裕计一对兼并引物,进行,扩增得到的片段,使用数据库对测序结果进行治觯峁允舅闷斡肜骋鹨略錝的同源性为%,所得片段为杜氏盐藻的一部分。根据所得片段再设计引物,进行┰龅玫絊的醵擞’末端。进行拼接,所克隆的杜氏盐藻騝ǔ,包含和疷。首先研究在转录水平上,蚴欠裼鞭毛的再生与重吸收相关。通过机械研磨法去除杜氏盐藻鞭毛,正常条件下培养,使鞭毛再生,通过秋水仙碱处理使鞭毛重吸收,在再生与重吸收过程中取不同时间点的藻提取醋B嘉猚惺凳庇ü舛縋,结果显示,在鞭毛再生与重吸收的过程中,转录量有明显升高。进一步通过産芯吭诘鞍姿缴蟂基因是否与鞭毛的再生与重吸收相关,首先进行原核表达,纯化蛋白,制备抗体。原核表达纯化的蛋白纯度达到%以上,完全符合制备抗体的要求,将纯化蛋白免疫动物,制备得到效价符合要求的抗体。羌谆揪吨械墓丶福狙芯恐な抵辽僭谧B***缴希氡廾ǖ某ざ鹊骺叵喙亍6罱灿醒芯肯允驹诒廾ǖ某ざ鹊骺毓中,部分鞭毛蛋白会发生***化与去***化的转变,并且有多个***化途径中的组分定位于鞭毛上,据此可以推测***化可能参与了鞭毛的长度调控【螅研究也为这个推测提供了证据。杜氏盐藻藻株为..,购自美国德州大学。使用改良嘌基培养,培养条件为:温度℃,光强馀嘌氚蹬嘌>摘要、疷
攀涎卧錝基因全长的克隆B***缴隙攀涎卧錝基因与鞭毛长度调控的关系攀涎卧錝蛋白的原核表达种为甤与甤,均为本实验室保存。载体鹤宝生物公司,1臼笛槭冶4妗比对多个物种中的鞍装被嵝蛄校≡衿渲斜J匦蛄校杓萍并引物。使用法提取杜氏盐藻总醋B嫉玫絚R灾票傅腸为模板,用简并引物进行┰龅玫蕉攀涎卧錝基因片段。再根据扩增得到的片段设计引物,法扩增’端序列。测序鉴定扩增的片段,根据测序结果使用软件拼接得到全长。使用机械研磨法处理杜氏盐藻,使其脱去鞭毛,鲁E嘌贡廾ǚ⑸生,在再生过程中提取不同时间点杜氏盐藻总皇褂们锼杉畲矸ㄊ挂生型杜氏盐藻,是鞭毛发生重吸收,在重吸收过程中提取不同时间