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2022年9月ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulaeSep.,2022
牡丹花总黄酮对高尿酸血症大鼠降尿酸作用
白莉,刘广运,张晓萍,苗明三*
(河南中医药大学药学院,郑州450046)
[摘要]目的:探究牡丹花总黄酮对高尿酸血症大鼠的药效学作用,为高尿酸血症治疗药物的研究开发提供科研数据支
()
撑。方法:使用腺嘌呤合并乙胺丁醇复制大鼠高尿酸血症模型,大鼠随机分为正常组、模型组、别嘌醇组42mg·kg-1、痛风舒
()()
片组600mg·kg-1、牡丹花总黄酮高、中、低剂量组TFPF260、130、65mg·kg-1。记录观察大鼠状态,每5d记录一次大鼠体质
;();;()
量测定末次给药24h大鼠尿量、饮水量、尿液中尿酸UA、尿蛋白水平计算大鼠肾脏指数苏木素-伊红HE染色法观察大
;()()()()()
鼠胸腺、脾脏组织测定大鼠血清中尿酸UA、肌酐Cr、血尿素氮BUN、丙二醛MDA、超氧化物歧化酶SOD活力、总抗
();()();()
氧化能力T-AOC活力测定大鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶XOD、腺苷脱氨酶ADA活性酶联免疫吸附测定法ELISA检测
()()()
大鼠肾脏中尿酸转运体1URAT1、阴离子转运蛋白1OAT1、葡萄糖转运蛋白9GLUT9含量。结果:与模型组比较,牡丹
()()();
花总黄酮可改善大鼠精神状态,增加大鼠体质量P<、促进大鼠尿液尿酸排泄P<,降低尿蛋白量P<
()();()
鼠24h尿量、饮水量、肾脏脏器指数P<、血清中UA、Cr、BUN、MDA含量P<,P<<、
();();(
ADA活性P<,P<<-AOC活性及肾脏中OAT1表达量P<
);
。结论:牡丹花总黄酮对高尿酸血症大鼠肾脏具有一定的保护作用,其作用与促进尿酸
排泄,抑制氧化反应,抑制尿酸合成关键酶活性,调节尿酸转运蛋白表达有关。
;;;;
[关键词]高尿酸血症牡丹花总黄酮尿酸尿酸转运蛋白
[中图分类号]R2-0;R22;;R33[文献标识码]A[文章编号]1005-9903(2022)18-0038-08
[doi].
[网络出版地址].
[网络出版日期]2022-03-078:23
EffectofTotalFlavonoidsinFlowerofPaeoniasuffruticosaonUricAcidin
RatswithHyperuricemia
BAILi,LIUGuangyun,ZHANGXiaoping,MIAOMingsan*
()
SchoolofPharmacy,HenanUniversityofChineseMedicine,Zhengzhou450046,China
[Abstract]Objective:ToexplorethepharmacodynamiceffectsoftotalflavonoidsofPaeonia
()
suffruticosaflowerTFPFsonratswithhyperuricemiaandprovidescientificdatasupportfortheresearchand
:Thehyperuricemiamodelwasinducedby
,amodel
()
group,twopositivecontrolgroupsallopurinolat42mg·kg-1andTongfengshutabletsat600mg·kg-1,and
()
high-,medium-,andlow-doseTFPFsgroups260,130,and65mg·kg-
observedandrecorded,-hoururinevolume,water
()
intake,uricacidUA,
[收稿日期]2021-11-29
[基金项目]国家自然科学基金项目(80274038);河南省药品监督管理局科技计划项目(2020DB135);河南省高等学校重点科研项目
(21A360016);河南省高等学校青年骨干教师培养计划项目(2020GGJS110)
[第一作者]白莉,博士,副教授,从事中药药理研究,E-mail:******@
[通信作者]*苗明三,博士,教授,博士生导师,从事中药药理研究,E-mail:******@
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,
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()()()
hematoxylin-,creatinineCr,bloodureanitrogenBUN,
()()()
malondialdehydeMDA,superoxidedismutaseSOD,andtotalantioxidantcapacityT-AOCofratswere
()()
.
()()
Thecontentofuricacidtransporter1URAT1,organicaniontransporter1OAT1,andglucosetransporter9
()()
GLUT9inthekidneywasdetectedbyenzyme-:Compared
(
withtheresultsinthemodelgroup,TFPFscouldimprovethementalstateofrats,increasethebodyweightP<
)()()
,promoteUAexcretionP<,reducethecontentofurinaryproteinP<,relieverenalglomerular
atrophy,renaltubularepithelialcellstatus,anduratecrystaldepositioninrenaltubules,dwindle24-hoururine
()()
volume,waterintake,kidneyindexP<,serumlevelsofUA,Cr,BUN,andMDAP<,P<,
()()
inhibittheactivitiesofXODP<<,P<,diminishtheexpressionof
()
GLUT9intherenalhomogenateP<,andincreaseserumSODandT-AOCactivitiesaswellasOAT1
()
expressionP<:
TFPFspossessaprotectiveeffectonthekidneyofratswithhyperuricemia,whichisachievedbypromotinguric
acidexcretion,inhibitingoxidationandtheactivityofkeyenzymesinuricacidsynthesis,andregulatingthe
expressionofuricacidtransporters.
[Keywords]hyperuricemia;Paeoniasuffruticosaflower;totalflavonoids;uricacid;uricacid
transporter
()
高尿酸血症HUA是体内嘌呤代谢紊乱导致1材料
的代谢性疾病,与痛风、高血压、,雄性,体质量190~
发展有着密切的联系[1-2]。HUA的治疗主要以饮食210g,84只,合格证编号1107262011002339,为济南
调节和药物治疗为主,使用的药物主要为黄嘌呤酶朋悦实验动物繁育有限公司提供,合格证号SCXK
()
氧化酶抑制剂、尿酸盐转运体抑制剂、尿酸酶等。鲁2019-0003。经河南中医药大学伦理委员会批
中医学将HUA归于“历节”“痛痹”等症,临床表现为准,批号DWLL201903009,河南中医药大学动物实
()
脾肾亏虚、痰浊湿热、瘀阻血脉之本虚标实之证,临验中心许可证号SYXK豫2020-0004。
()
床遣方用药采取健脾补肾、泄浊利湿、,河南中医药大
治则[3-5]。学药理实验室制备,牡丹花购于菏泽市国伟牡丹种
牡丹享有“国色天香”“花中之王”的美称,同时植有限公司,牡丹花经河南中医药大学陈随清教授
兼有食用价值、药用价值、观赏价值和生态价值,常鉴定为毛茛科芍药属植物牡丹的花。采用干燥牡
(
以根皮入药,花类用于功能性食品的开发[6]。牡丹丹花瓣于70%乙醇60℃温浸2次料液比
)
的根皮即牡丹皮,又称丹皮,味苦、辛,微寒,归心、1∶8mL·g-1,每次4h,重复提取2次,合并滤液,减
(
肝、肾经,具有清热凉血、活血化瘀、退虚热等功效。压浓缩,粗浸膏经AB-8型大孔树脂精制上样量
)
现代药理学研究表明,牡丹皮醇提物体内外实验均10∶1,依次以纯水、10%、60%、90%乙醇梯度洗脱
()()
可有效抑制黄嘌呤氧化酶XOD活性、降低体内尿每个洗脱剂用量为3倍柱体积,流速为2BV/h进
酸水平[7-8]。牡丹叶中酚类及黄酮类化合物,能抑制行洗脱,收集10%和60%部分,减压浓缩干燥,得到
()()
尿酸UA的生成,促进UA的排泄,在防治痛风性TFPF。以芦丁为对照品纯度>98%,紫外分光光
;(
关节炎及延缓关节损伤等方面具有一定优势[9-10]。%腺嘌呤北京索莱宝科技
);(
牡丹花和牡丹皮、牡丹叶同根同源,其中含有丰富有限公司,批号1014G051乙胺丁醇上海上药信
的多酚和黄酮成分,具有较强的抗氧化活性[11]。但谊药厂有限公司,国药准字H31021140,批号
);(
牡丹花对高尿酸血症的研究尚未报道。本研究通063180757别嘌醇缓释胶囊黑龙江澳利达奈德
);(
过复制大鼠高尿酸血症模型,验证牡丹花总黄酮对制药有限公司,批号19070907痛风舒片山西仁
)
大鼠体内尿酸水平、尿酸合成关键酶的活性及排泄源堂药业有限公司,批号20180706。
()(
转运体的活性的作用,、肌酐Cr试剂盒肌氨酸
)
影响及其肾脏保护作用。氧化酶法、尿蛋白定量试剂盒、血尿酸检测试剂
39··
,
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()()
盒、尿素氮BUN试剂盒脲酶法、
()()
剂盒、超氧化物歧化酶SOD试剂盒WST-1法、收集各组大鼠24h尿液,磷钨酸法测定大鼠尿液中
()()
丙二醛MDA测定试剂盒TBA法、总抗氧化能尿酸含量,CBB法测定大鼠最后一次24h尿液中尿
()(
力T-AOC试剂盒南京建成生物工程研究所,批蛋白含量。
号分别为20201019、20201020、20201012、,仔细取出大
20200624、20201014、20201021、20201014、鼠肾脏,先用生理盐水将脏器上附着的血迹、毛发
);(
20201013、20201013羧甲基纤维素钠CMC-Na,清理干净后,再用吸水纸将多余水分吸干,准确称
);
天津市光复精细化工研究所,批号20160728B大量其湿重并计算其脏器指数。脏器指数=脏器湿重
()()()
鼠阴离子转运蛋白1OAT1、葡萄糖转运蛋白9mg/大鼠体质量g。
()()
GLUT9、尿酸转运体1URAT1、,称
()(
吸附测定法ELISA试剂盒苏州卡尔文生物科技质量,大鼠麻醉后腹主动脉取血。阴凉柜中静置半
(
有限公司,批号分别为E20201201A、E20201108A、小时后,离心机分离血清4℃,3500r·min-1离心
);())
E20201116A、E20201101A苏木素-伊红HE染色10min,离心半径6cm,下同,取上清液,存
(
试剂盒上海碧云天生物技术有限公司,批号于-40℃备用。酶比色法检测UA含量,肌氨酸氧
)
C0105S。化酶法检测Cr含量,脲酶法检测血BUN含量,
();
-Rad公司WST-1法检测SOD活性,TBA法检测MDA含量,
()(
Forma900系列超低温冰箱-80℃美国ThermoABTS法检测T-AOC活性。
);
Fisher科技有限公司KDC-,将
();
心机湖南湘仪实验仪器开发有限公司UV1901大鼠肝脏迅速取出,剪取部分肝脏右叶组织称重后
(
型紫外-可见分光光度计上海奥析科学仪器有限与预冷的生理盐水按1∶9混合,低温匀浆机中匀浆,
)()
公司。离心机离心4℃,3500r·min-1离心10min后取上
2方法清液,比色法检测大鼠肝脏组织匀浆XOD活性,过
,氧化物酶法检测大鼠肝脏组织匀浆中腺苷脱氨酶
()
光照12h/d。动物适应性饲养3d后随机分为7组,ADA活性。
()
分别为正常组、模型组、别嘌醇组42mg·kg-1、
()
风舒片组600mg·kg-1、TFPF高、中、低剂量组迅速取出,准确称量其质量,计算脏器指数,切其部
()
260、130、65mg·kg-1,本实验通过预实验探究发分后准确称质量,与预冷的生理盐水按1∶9混合,低
(
现TFPF对高尿酸血症大鼠的最佳给药剂量的温匀浆机中匀浆,离心机离心4℃,3500r·min-1离
)
130mg·kg-1,因此实验过程中将这个剂量作为给药心10min后取上清液,ELISA检测大鼠肾脏组织匀
的中剂量。每组12只。实验期间,除正常组外其余浆中URAT1、OAT1、GLUT9含量。
()()
各组动物每天灌胃腺嘌呤100mg·kg--伊红HE染色病理学检测取大鼠胸
()()
醇250mg·kg-%CMC-Na,正腺、脾脏组织固定于10%甲醛溶液中,进行石蜡包
%CMC-Na溶液,连续埋及切片后,HE染色,在光镜下观察各脏器组织形
;
23d从造模开始,每5d用代谢笼收取正常组和模态学变化。
型组大鼠24h尿液,记录尿量、饮水量、
ˉ
尿酸含量,若正常组和模型组比较,尿液中尿酸含数据进行分析、处理和统计,结果用x±s表示,各组
量有明显差异,则模型制备成功,即复制大鼠高尿间比较采用单因素方差分析,方差齐则用最小显著
()
酸血症模型[12]。造模第5天开始给予药物,各组灌性差异法LSD进行检验,方差不齐则用Games-
胃给予的药物,正常组、模型组每天给予相同体积Howell法检验,两独立样本用T检验,病理结果采用
的纯水。给药体积均为10mL·kg-1。在末次给药Radit检验法进行分析,P<
2h后取得实验样本。意义。
,每天认真观察并记3结果
录各组大鼠的精神状态、毛色、垫料等情况,
称量大鼠体质量1次,包括取材前大鼠的体质量。过程中,正常组大鼠体质量增长持续稳定,造模5d
40··
,
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后与正常组大鼠比较,模型组大鼠体质量虽无明显
差异,但有降低趋势,造模15d起,模型组大鼠体质
();
量显著降低P<,与模型组大鼠比
(
较,TFPF与别嘌醇组大鼠体质量均显著增加P<
)
,别嘌醇组大鼠体质量增长虽差异无统计学意
义,但也呈现增长的趋势。见图1。
、饮水量、尿
;;;;
蛋白含量及尿酸水平的影响与正常组比较,模型注:
;;()
组大鼠24h尿量、饮水量、
()ˉ
增加,24h尿液尿酸含量显著降低P<。与模图1TFPF对高尿酸血症模型大鼠体质量的影响(x±s)
型组比较,TFPF高、低剂量组、别嘌醇组24h尿量明ˉ
();rats(x±s)
显减少P<,P<、痛风舒片组、
();
TFPF低剂量组饮水量显著降低P<、TFPF高、中、低剂量组尿液中尿酸含量均
();()
剂量组尿蛋白含量明显降低P<、痛显著升高P<。见表1和表2。
ˉ
表1TFPF对高尿酸血症模型大鼠24h尿量及饮水量的影响(x±s)
ˉ
Table1EffectofTFPFon24hurinevolume,drinkingwatervolumeinhyperuricemiamodelrats(x±s)mL
组别n剂量/mg·kg-124h尿量24h饮水量
±±
))
±±
))
±±
)
±±
)
±±
±±
))
±±
注:与正常组比较1)P<,2)P<;与模型组比较3)P<,4)P<(表2-表7同)
ˉ
表2TFPF对高尿酸血症模型大鼠24h尿液尿酸、尿蛋白含量的影响的影响(x±s)
ˉ
Table2EffectofTFPFon24hurinaryproteincontentanduricacidlevelsinhyperuricemiamodelrats(x±s)
μ
组别n剂量/mg·kg-124h尿液尿蛋白含量/mg·L-124h尿液尿酸含量/mol·L-1
±±
))
±±
)
±±
)
±±
))
±±
)
±±
)
±±
()
<。与模型组比较,各给药组大鼠血清
正常组比较,模型组大鼠肾脏指数显著升高中SOD、T-AOC水平均有不同程度的增强,血清中
()
P<。与模型组比较,别嘌醇组、痛风舒片组和MDA含量均有不同程度降低。见表4。
(
TFPF高、中、低剂量组大鼠肾脏指数明显降低P<、Cr、BUN水
)
,P<。见表3。平的影响与正常组比较,模型组大鼠血清中UA、
();
、T-AOC、Cr、BUN的含量均显著增加P<
MDA水平的影响与正常组比较,模型组大鼠血较,别嘌醇组、痛风舒片组、TFPF高、中剂量组大鼠
(
清中SOD、T-AOC水平均显著降低,MDA含量显著血清中UA、Cr、BUN水平明显降低P<,P<
41··
,
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ˉ
表3TFPF对高尿酸血症模型大鼠肾脏指数的影响(x±s)、ADA水
Table3EffectofTFPFonrenalindexinhyperuricemiarats
ˉ平的影响与正常组比较,模型组大鼠XOD、ADA
x±s();
()的活性均显著增加P<,TFPF
剂量肾脏脏器指数
组别n高剂量组、低剂量组大鼠肝匀浆中XOD的活性明显
/mg·kg-1/mg·g-1();
降低P<、痛风舒片组、TFPF各剂量
±(
组均可明显抑制大鼠肝匀浆中ADA的活性P<
)
2)
±,P<。见表6。
)
±、GLUT9、OAT1
)
±,模型组大鼠肾脏中
)()
±、GLUT9蛋白含量显著升高P<,而
()
)
±<。与模型组比较,
)TFPF对URAT1蛋白含量有升高趋势,但差异无统计
±;
学意义痛风舒片组、TFPF可明显降低GLUT9蛋白含
)()()
。见表5。量P<,升高OAT1蛋白含量P<。见表7。
ˉ
表4TFPF对大鼠血清SOD、T-AOC、MDA水平的影响(x±s)
ˉ
Table4EffectofTFPFonSOD,T-AOCandMDAlevelsinserumofrats(x±s)
组别n剂量/mg·kg-1SOD/U·mL-1MDA/nmol·L-1T-AOC/mmol·L-1
±±±
)))
±±±
))
±±±
)
±±±
)))
±±±
))
±±±
))
±±±
ˉ
表5TFPF对大鼠高尿酸血症模型血清UA、Cr、BUN水平的影响(x±s)
ˉ
Table5EffectofTFPFonserumlevelsofUA,CrandBUNinhyperuricemiarats(x±s)
μ
组别n剂量/mg·kg-1UA/mol·L-1Cr/ng·L-1BUN/mmol·L-1
±±±
)))
±±±
)))
±±±
)))
±±±
)))
±±±
)))
±±±
))
±±±
、脾脏组织形态的正常组大鼠脾脏组织红白髓分界清楚,脾小结体积
;
影响正常组大鼠胸腺体积大小正常,分叶清楚,正常,中央动脉清晰,淋巴细胞较为密集模型组大
皮质较厚,皮质髓质之间分界清晰,皮质上淋巴细鼠多数脾小结体积缩小,数量减少,红白髓分界模
;;
胞排列密集模型组大鼠多数胸腺出现萎缩现象,糊,形态不规则,脾窦瘀血,淋巴细胞数量变少别
皮质髓质融合,界限不明显,细胞稀疏,淋巴细胞数嘌醇组、痛风舒片组及TFPF各给药组均不同程度
;
量减少与模型组比较,痛风舒片组、TFPF给药组胸的增大大鼠脾小结体积,降低红白髓分界模糊程
腺皮质髓质界限较为清楚,皮质厚度增厚,淋巴细度,脾脏组织病理形态有不同程度的改善。
胞数量增多,病理状态有不同程度改善。见图2。见图3。
42··
,
2022年9月ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulaeSep.,2022
ˉ
表6TFPF对高尿酸血症模型大鼠XOD、ADA水平的影响(x±s)
ˉ
Table6EffectofTFPFonXODandADAlevelsinhyperuricemiarats(x±s)
组别n剂量/mg·kg-1XOD/g·L-1ADA/ng·L-1
±