文档介绍：第期光谱仪器与分析
基于荧光光谱及高活性固定方法的蛋白质芯片研究
廖玮赵新生
北京大学分子动态与稳态结构国家重点实验室及化学与分子工程学院化学生物学系
摘要
随着后基因组时代的来临,蛋白质芯片—作为高通量蛋白检测和筛选的重要手段一一的研究变得
越来越重要。蛋白分子在固体表面的固定,一直是蛋白质芯片研究的核心问题之一。影响蛋白质分子在
固体表面性质及行为的因素主要有疏水相互作用,静电相互作用,表面微环境。我们通过表面荧光光谱
表征了一和一朋表面固定蛋白的情况。为考察一和一在固定蛋白效率
上的差异,另一方面为了解蛋白质在表面的物理吸附程度,分别将一和,一浸泡于含有和
没含有活化利的蛋白质溶液中进行固定反应,然后清洗检测荧光。结果如图所示,活化后固定在
表面的蛋白比一表面固定的稍多,而物理吸附的量在两种表面却有较大的差别。一
表面吸附的蛋白却明显少于一表面吸附的蛋白数量。为了考察不同方法固定蛋白在表面上
活性差异,我们先在一和一表面固定,然后分别与不同浓度的、一反
应,清洗后检测荧光。得到的数据用吸附等温式进行拟合,得到平衡常数分别是一
士一土。有特异性识别和无特异相互作用的蛋白
对之间的信号比较,也是衡量表面蛋白活性和生物传感器优劣的一个重要标准。我们选取了血浆中含量
最大的三种蛋白作为测试模型分子,即兔够一,牛血清白蛋白,纤维蛋白原
。将这三种分子分别固定在和表面,最后与含有活化剂的一羊抗兔溶
液反应,清洗后检测荧光。得到了如图所示的结果。无论是一还是一表面,特异识别
的分子对兔喊和℃一羊抗兔够信号都远大于其他两种无特异相互作用的蛋白质分子对。以上实
验可以证明一和一都可以用来进行高活性蛋自质芯片的制备。
﹃
种妙
钾
呻
巴
幻
。如
己
曰呻
呵
。
。旧初佣八叼

图图
图蛋白质溶液是否含有活化剂对一和一、固定蛋白荧光信号的比较
图一和一。固定一喊后,与特异识别的一反应的等温线
图一和一表面分别固定了兔一够,牛血清白蛋白,纤维蛋白原后,与
℃一羊抗兔喊反应所得到的荧光信号比较
〔本研究得到国家重点实验室基础研究发展规划国家白然科学摧金的资助〕、