文档介绍：一一⋯一一学生杨长庚谨以此论文献给中国海洋大学
指导教师签字:桧美、牙鲆卿阳淅大菱鲆陬印办砌口砌扰口扰妙免疫相关基因的克隆及其性质与功能的研究\:一学位论文完成日期:答辩委员会成员签字:
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学位论文作者签名:一/愀导师签字:签字日期::彳怒始陡签字日期:≯一年妇签字嗍如苣曷拊\:奎拦亘窒蚱渌逃沟难换蛑な槭本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ\
大菱鲆痬⒀丽/免疫相关基因的克隆及其性质与功能的研究摘要大菱鲆、牙鲆是我国重要的海水经济养贿鱼类。近年来,养殖环境的恶化导致了养殖病害频发,不但造成了巨大的经济损失,而且还严重制约了相关养殖产业的健康发展。在鱼类对外界刺激及病原物侵袭的防御反应中,非特异性免疫起着重要作用。因此,利用分子生物学及基因工程手段研究鱼类免疫相关基因的功能及其网络调控过程,对于揭示鱼类抗病机理、开发鱼类抗病种质及研发用于鱼类疾病治疗的抗病工程制剂和药物等方面具有重大的理论意义和社会价值。抗菌肽在鱼体与病原生物不断抗争的过程中起到固有防御的作用。在众多的抗菌肽中,是一种研究的较为详细的小分子抗菌肽,它同时还具有调控细胞中铁离子浓度的作用。.築位于样受体,下游信号通路的枢纽位置,当细胞受到病原体刺激后产生应激反应,激活.,⑾赴蜃拥谋泶铮舳对病原微生物的固有免疫和获得性免疫。。本文围绕大菱鲆、牙鲆免疫相关基因的功能及其调控网络,以大菱鲆中两个免疫相关基因蚐把丽抑蠵基因为研究对象,开展了相关基因的性质与功能的研究。首先,分别利用技术和基因组步移的方法获得了的全长和启动子区序列。序列分析结果表明,,。此外,外源添加蛋白可以调控细胞中铁离子含量的实验进一步验证了的功能。为明确的网络调控过程,本研究克隆了调控相关因子的全长序列,并利用荧光实时定量觳庀菌或病毒感染以及注射外源蛋白情况下肝、脾、肾组织中,、的表达变化。结果表明,伴随着表达量的升高,表达明显降低,表达有所降低或变化不明显。利用的方法对基因沉默的大菱鲆肾脏细胞中这三个基因的表达模式进行了研究,结果同样证实了上述基因表达规律。通过以上实验结论及前人的研究结果,和
明,这两个蛋白一以及能够与嗷ソ岷希渲我们推测、、三者在调控铁离子平衡过程中起重要作用,同时在大菱鲆抵抗外源病原物过程中,的表达迅速增加,影响其他相关基因变化,改变细胞中铁离子浓度,从而对外界刺激及病原物侵袭起到防御作用。其次,我们利用技术获得蛉ǔぁ5鞍自げ獗砻且恢趾说鞍住@,证实了暮硕ㄎ恍藕存在于蛋白醵耍淙桓玫鞍锥ㄎ挥诤四冢⒉斡朊庖咝в虻牡骺兀亲约せ实验结果表明痪哂凶约せ罨钚裕皇且恢肿B家蜃印@糜ü馐凳定量椒ḿ觳饬讼妇虿《靖腥竞螅罅怫业母巍⑵ⅰ⑸鲎橹约按罅怫肾脏细胞系中谋泶锴榭觯峁砻鱏的表达受到细菌及病毒诱导。在与牙鲆免疫相关基因的研究中,我们构建了牙鲆酵母双杂交文库,该文库的原始库容量为约×痬跫段目飧视捅4嬉旱味仍嘉..┰龇糯笪目饪馊菰嘉.×痬W;湍赶赴笕萘课#痬4游目庵形颐欠⑾侄嘀置庖呦喙鼗虿⒖寺〉絇基因全长。随后使用魑S斩秆∮肫湎嗷プ饔玫牡鞍字剩荷秆〉玫阳性克隆,获得了隹赡芟嗷プ饔玫幕颉4又醒≡窳个可能与免疫相关或者是蛋白预测后位于细胞核中的蛋白进行了酵母回转验证及分段验证,结果表与幕プ魑坏憧赡芪挥谄銷木端。通过荧光实时定量检测细菌感染牙鲆的肝、脾、肾组织中琍以及的表达变化,结果表明这三种基因均受到外源病原物的诱导,通过其响应时间的不同推测它们可能处于免疫信号转导途径的不同位置。最后,构建了琍的原核表达重组质粒,并在大肠杆菌中进行了原核表达,为进一步验证与相互作用及揭示其性质与功能奠定了基础。关键词:大菱鲆;牙鲆;免疫相关基因;坏骺赝纾唤湍杆杂交×籄!!。。。。。。。。。。———!!!!!!!RⅡ
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