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中国水稿科学&,‘:
提高稻瘟病菌转化频率的研究
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摘要:为提高—质牝导耩瘟病菌迎的遗传转化体系的转化串进行埘转化嫂串彤喻
手的研究。稀瘟病黹转化溶械中使/、浓度,% 戒‰多裳物
舔加腭鲱鱼精,供体质粗昼直线状都有利转化额书的提其衄精川为
丝并,由于潦加鲜鱼特,。热山埘稻瘟痛转化
,反而超转化频率的明姓下降。
关键词塑基堕盥,鲑岱筮车:鲱鱼精~;.塞:
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目前已在大约多种丝状真菌中建立起养和再生以及以潮霉素抗性为选择标记的
转化技术“。遗传转化体系的建立为遗传转化技术”。但真菌病原菌不同细菌,
真菌分子遗传学的研究提供了有力的手段。真转化频率普遍很低。为此,本文应用化
菌病原菌的遗传转化有两大体系,一是依裁于学融合法,研究转化过程中诸如种类和
营养缺陷互补的转化方法,将野生型菌株浓度,氯化钙以及载体等因手对潮霉尜
标记导入至营养缺陷型突变菌株中,通基因导人稻瘟病菌频率的影响,试图提高稻瘟
过表型互补选择转化子。二是导人抗药性显性病菌转化频率
标记的转化方法,所用药物有潮霉素
材料和方法
苯菌灵和等,后者更适
用于病原真菌。. 茸株和原生质体制备
等利用营养缺陷标记首次受体菌由国际水稻研究所椒嫡系
建立稻瘟病菌转化系统‘”。我们实验室在
年也建立了稻瘟病菌原生质体培月收割。.
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巾国水稻科学第卷第期
提供。菌落呈黑灰色,致病水稻植株。该菌的
结果
培养和原生质体制备方法按乇金霞所述该
菌章基牛培养基补加. 聚二醇对稻瘟病菌转化频率的
’/平板上完垒被抑制影响
. 质粒和印迹分析根据文献报道,选用.
,分别设计% 和
.。质粒含有构巢曲霉菌一磷酸甘油醛% 两种浓度。均和/
脱氢酶基因启动子/山梨醇/氯
和基因。基因可在真菌中表达,作为化钙配制成转化溶液。稻瘟病菌原生质体浓度
选择标记基因。为× /口每一处理中供转化用
转化程序利用融合方法,参考杨炜等质粒量为以下各处理
。均同。结果如表所示, 浓度直接影
裹影响稻■庸■转化率的因子
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黄太年等:提高再疽搞转化频苹的充
响稻瘟病菌的转化频率,如% 的。从述组的粜卫难看.
转化频率为. 转化子/,向%/ 转化
% 仅转化子/;『牢,较之%/
样,%的转化率为% 处理更高。
的倍以上。因此,%浓度较之% 度的合腭配,必能性进转化产数增。
的更能促进质粒导入稻瘟病菌,获得较也就是【兑,删使氯化钙浓度明到城浓度
多的转化子。根据我们的试验结果, /, 浓度偏低% ,转化
多襄物转化稻瘟病菌较更有利率仍然浙卡反. 浓度低
氯化钙浓虞对转化频率的影响% ,配以/、
众所周知,¨有提高