文档介绍：摘要稻瘟病菌芄璴起水稻上的一静重要瘸害一稻瘟病,,作为丝状真菌致病机理与分子生物学研究的重要模式菌,腻功能基因的克隆对于了解其他病原真菌与寄主的互作也具有重要意义。基因文库是克隆基因并研究其功能的重要手段,大容量的基因文库结合有效的转化方法,是通过表型置补进行基因克隆的基础。特别是条件突变体缥露让舾行屯槐涮宓,通过表型互补克隆相关基因是一种基本的方法。本研究构建了程瘟菌基因组文库,楚基霞组文库的构建制备了所需的基因组痛砹嗽靥錺,同时对稻瘟病菌电击转化进行了初步探索,为进一步通过表型甄补克隆相关基因打下了基础。现总稻瘟病菌基因组文库构建采用靥骞菇说疚敛【闓蜃槲目狻@肧及蛋白酶ㄌ崛±胫柿炕蜃镈,并用黾罨侗鹞坏愕南奁谛皂ㄇ忻对基因组进行不完全酶切,获得大小约的基因组片段,连接包装后,,相骞于每徽克基因组疾鷏。稣沉?寺。沉?寺』旌嫌ジ首侵胁⒂瑁下保存。对个随机重组子分析表明,%【蜃镈大小为计算,库容量已高达.。夏时,根据和公式巾甪扑惴治霰砻鳎砺凵从该文库中筛选到任一蛄械母怕试ヒ陨稀6岳┰霰4婧笪目饩液滴度测定显示该文库滴度约为×/,而进行畏锤炊橙诤螅涞度仍可达×/。各项实验结果均表明本实验构建约粘粒基因组文库质量比较高,为进一步功能基因的筛选分离提供了保障。构建稻瘟病菌库所需基因片段的制备及载体的处理要采用柿盖性靥骞菇ǖ疚敛【蜃槲目猓肧及蛋白酶椒ㄌ崛×烁咧柿康幕蜃镈,。并对载体忻盖写恚嘈腥チ姿嵋冢蛊浯锏搅私ǹ獾谋曜肌稻瘟病菌高效转化方法的探索结如下:澎茳大学矮圭学位论文籀瘟病蘑轰效表达文疼酶鹅建
本实验主要对电击转化的各静条件进行探索,主要包括电击缓冲液,电击电压,电击条件下原生质体的制备。以期能够获得高效转化最佳条件,结果发现电击转化并不能成倍提高转化效率。关键词:稻瘟病菌基鑫鳃文库电击转化游江大学琰±学位论文稻瘟痰麓嵩效表达文痒的梅建
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学位论文作者签名:多/;岳七签字吼训苫年占月扇签字曰期:∥年占月目训镅√乡版帑南七签字日期:弘凇扩年∥月/汐日浙江大学研究生学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书构送交本论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。,也不包含为获得逝姿盘鲎或其他教育机构的学位或本学位论文作者完全了解进姿基堂有权保留并向国家有关部门或机本人声明所呈交的学位论文是本入在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方夕畚闹胁话渌艘丫证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据痒进行检索和传播,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。学位论文作者签名:中作了翳确的说翳并表示谢意。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ导师签名:一
张福生四晡逶掠诤贾莼<页嘏致谢二本论文是在导师王洪觊虱研究员的悉心指导下完成的。导师严谨求实的治学态度、谦逊随和的为师风范、丰富的阅历,广博的知识使我终生受益。导师孜孜不倦的言传身教将会让我在今后的人生道路上不断披荆斩棘。谨此向导师两年来给予的辛勤培养和谆谆教诲表示衷心的感谢。本研究工作受到了林福呈教授,张敬泽副教授的具体指导。从实验的设计到结果的分析无不倾注了几位老师大量的心血。在工作中,几位老师锐意迸取的科学耩狰、新颖敏锐瞬研究思路成为我今后王作和生活中宝贵的财富。在此盎凡位老师两年年来给予的工作上的理解与支持、生活上的关心与帮助致以诚挚的谢意。在研究的开展和论文昀撰写过程中,本研究组酶卢建平老好、章初龙老师、陈绍媛老师都给予了热情帮助和支持,在此表示由衷的感谢。感谢本实验室的刘小红、董波、刘同宝、赫荣琳、姜敏、段志兵、张磊、劳佳萍、郑必强、鲁书玲、颁轶、蘸诒篓、胡峰等师兄弟姐妹们在工作和生活中给予的关心和帮助。与大家互相帮助,愉快相处,其乐融融的情景留下了许多美好的记忆,让我终生难忘。感谢大洋化工的王、吴双鹏曾给予的关心和支持;感谢中心大楼乃锘⒋嵝衷谑笛樯系南ば闹傅迹蜕钪嘘拦匦闹С郑还感谢中心大楼睦蠲鹘趼纺⒄爬隼鲈谑笛樯系陌镏桓行皇矣讯±松、李冉、屠奇超两年来的关心支持;感谢家人对我学业和生活一如既往的理解、支持与关心。本研究的完成离不开他们两年来默默的付出和无私昀爱。感谢两年来所有给过我关心和支持的老魉、同学和朋友们激汪大学硕士学位论文裙痘瘸麓高效表达文痒静梅建