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《PCR实验室检查要点(xx)》
第一篇:pcr实验室检查要点(xx)聚合酶链反应(pcr)检验实
验室
检查要点指南(xx版)
聚合酶链反应检验实验室是指通过基因扩增的方式检测特定的
dna或rna的检验实验室。聚合酶链反应(polymerasechainreaction,
pcr)是一种在体外特异性扩增靶dna序列的技术,其基本过程为模
板双链dna的变性、引物与模板dna的退火和在dna聚合酶引导下的
链延伸反应三个阶段的多次循环。每一次循环后的扩增产物均可作为
下一轮循环的模板,理论上,扩增产物量呈指数形式上升,即经过n
个循环后,产物量增加到2n倍。pcr试剂操作简单,短时间内在体外
可获得数百万个特异靶dna序列的复制,为临床疾病的诊断、治疗监
测和预后评估提供了一种极有帮助的实验室辅助手段。
pcr检验实验室是pcr试剂生产企业在产品检验过程中不可缺少
的工作环境,其环境控制水平和质量管理水平直接影响着最终产品是
否合格,能否放行。由于该产品本身的特殊性,《医疗器械生产质量
管理规范附录体外诊断试剂》、《医疗器械生产质量管理规范体外诊断
试剂现场检查指导原则》条款中,明确对pcr试剂的生产和检验环境
做出规定。此外现行卫生行业的法规、标准以及相关文献中对于pcr
检验实验室均作出规定,主要涉及《全国临床检验规程》(第三版)、
《医疗机构临床基因扩增管理办法》(卫办医政发〔xx〕194号)、《医
疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》及《临床诊断中聚合酶链:.
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反应(pcr)技术的应用》(ws/t230-xx)等行业标准的相关要求。本
检查指南旨在帮助北京市医疗器械监管人员增强对pcr检验相关过程
的认知和把握,指导全市医疗器械监管人员对pcr检验实验室设计建
设与质量控制的监督检查工作。同时,为pcr试剂生产企业在pcr检
验实验室的设计建造和管理要求提供参考。
当国家相关法规、标准、检查要求发生变化时,应当重新讨论以
确保本检查指南持续符合要求。
一、适用范围
本检查指南可作为北京市食品药品监督管理局组织、实施的体外
诊断试剂产品注册质量管理体系现场核查、《医疗器械生产许可证》
现场核查、医疗器械生产监督检查等各项涉及pcr检验实验室检查的
参考资料。
基因测序检验实验室等涉及pcr试剂的相关部分应当参照本检查
指南执行。
二、检查要点
(一)现场查看生产企业pcr检验实验室布局
生产企业应当提供pcr检验实验室设计方案和/或平面设计图(应
当标明风向或压差梯度)。
或空间内,保证空气不直接联通,防止扩增时形成的气溶胶造成交叉
污染。
。试剂储存和准备区、:.
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标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。根据使用仪器的功能,区域
可适当合并。若使用实时荧光定量pcr仪且不需要进行后续产物分析
工作,扩增区、扩增产物分析区可合并。若使用样本处理、核酸提取
及扩增检测为一体的自动化分析仪,则标本制备区、扩增区、扩增产
物分析区可合并。
,各区域无论是在空间
上还是在使用中,应当始终处于完全的分隔状态。不应当只是形式上
的分区,不应当是一个区域嵌套一个区域。
。扩增区与扩增产物分析区各
区域宜采用独立直排方式出风。采用空调机组方式的,pcr检验实验
室应当具备独立空调机组;同时应当考虑停机后各房间空气连通的可
能性,采取必要的控制措施。
→标本制备区→扩增区→扩增产物分
析区方向空气压力应当以递减的方式进行,使得pcr检验实验室的空
气流向应当按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产
物分析区方向进行,防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。空
气流向应当为单向,禁止下游污染上游。应当设臵合理的压差梯度,
并安装压差监测装臵,以有效证明空气流向,压差梯度不宜低于5帕。
,缓冲间内通向内实验室和走廊的门应当安装连
锁装臵或采取相应措施,避免出现两个门同时打开的情况。
,应当为双侧开门,要求密封严实,并且
两侧的门应当为互锁装臵或采取相应措施保证两侧门不会同时开启。:.
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(二):贮存
试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸
头等消耗品的贮存和准备。配套用品一般应当包括:
(1)温度调控范围为2℃~8℃和(或)-20℃以下冰箱;(2)混
匀器;(3)微量加样器;(4)紫外消毒设备;
(5)消耗品。一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头;
(6)专用工作服和工作鞋(套);(7)专用办公用品。
:核酸(rna、dna)提取、贮存及加样。配
套用品一般应当包括:
(1)温度调控范围为2℃~8℃和(或)-20℃以下冰箱;(2)高
速离心机;(3)混匀器;
(4)水浴箱或加热模块;(5)微量加样器;(6)紫外消毒设备;
(7)生物安全柜;
(8)消耗品:一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头
(带滤芯);
(9)专用工作服和工作鞋(套);(10)专用办公用品;
(11)如需处理大分子dna,应当具有超声波仪。
:cdna合成、dna扩增及检测。配套用品一般应
当包括:
(1)核酸扩增仪;(2)微量加样器;(3)紫外消毒设备;
(4)消耗品。一次性手套、一次性帽子、耐高压处理的离心管
和加样器吸头(带滤芯);(5)专用工作服和工作鞋;(6)专用办公:.
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用品。
:扩增片段的进一步分析测定。视检验
方法不同而定,基本配臵如下:(1)微量加样器;(2)紫外消毒设备;
(3)消耗品。一次性手套、一次性帽子、加样器吸头(带滤芯);
(4)专用工作服和工作鞋;(5)专用办公用品。
应当建立设备维护保养规程,计量设备应当定期检定。例如核酸
扩增仪、微量加样器、生物安全柜、离心机应当每年进行检定或校准
工作。
(三)
按照单一方向进行,即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩
增产物分析区。
,不同工作区域内的设备、物品
不得混用。
,不得混用(例如可以采
用不同颜色)。
→标本制备区→扩
增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的
清洁用具并防止交叉污染。实验垃圾属于医疗废物的应当按照《医疗
废物管理条例》相关规定进行处理。
,应当立即对工作区进行清洁及消毒。
:.
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剂贮存和准备区,不能经过扩增检测区。应当对加样吸头、pcr反应
管等消耗品处理,防止污染。试剂盒中的阳性对照品及质控品应当保
存在标本处理区。试剂应当使用分子生物学级别试剂,使用的纯化水
应当高压灭菌。质检用于原辅料、半成品、成品检验用的pcr反应试
剂应当有相应的质量标准及操作程序。
,加入待测核酸后,应当盖好含反应
混合液的反应管。应当注意pcr反应液加样的顺序,应当为空白样品
→阴性对照→样品→阳性对照。对具有潜在传染危险性的材料,应当
在生物安全柜内开盖,并有明确的样本处理和灭活程序。
,尽量减少在扩增区内的走动,扩
增反应管不得在扩增区打开。
溴化乙锭、丙烯酰***、甲醛或放射性核素等,应当注意实验人员的安
全防护。
(四)现场检查人员培训情况
参与pcr检验的工作人员应当具备相应的专业知识和技能,包括
能熟练操作相关设备,明确整个工作的流程,掌握出现污染情况的处
理方法以及实验室质量控制方法和检测结果的解释。
检查人员可以通过询问或要求人员实际操作对其进行评价,也可
以通过查阅人员培训记录,对其进行评价。
(五)现场检查文件情况
在检查过程中应当特别注意现场查看、询问、记录的实际情况与:.
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生产企业的文件规定、记录的符合性。
附件:
理想的pcr检验实验室设计
图a缓冲间为负压的理想pcr检验实验室设臵模式
图b缓冲间为正压的理想pcr检验实验室设臵模式
图a和图b所给出的pcr检验实验室设臵图是较为理想的设臵模
式,建议企业参照此种模式设计并建立实验室。
参考资料:
1.《关于发布医疗器械生产质量管理规范的公告》(国家食品药
品监督管理总局公告xx年第64号)
2.《关于发布医疗器械生产质量管理规范附录体外诊断试剂的公
告》(国家食品药品监督管理总局公告xx年第103号)
3.《关于印发医疗器械生产质量管理规范现场检查指导原则等4
个指导原则的通知》(食药监械监〔xx〕218号)
4.《生物安全实验室建筑技术规范》(gb50346-xx)5.《实验室生
物安全通用要求》(gb19489-xx)
6.《临床诊断中聚合酶链反应(pcr)技术的应用》(ws/t203-xx)
[第3版],中华人民共和国卫生部医政司,
xx年11月2日
—,
departmentofpathology,universityofvirginia,charlottesville,
—:.
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worldhealthorganization[sea-hlm-419]
第二篇:(北京市)pcr实验室检查要点企业pcr检验实验室布验
收注意事项
企业应当提供pcr实验室设计方案和/或平面设计图(应当标明
风向或压差梯度)。
或空间内,保证空气不直接连通,防止扩增时形成的气溶胶造成交叉
污染。
。试剂储存和准备区、
标本制备区、扩增区、扩增产物分析区,根据使用仪器的功能,区域
可适当合并。若使用实时荧光定量pcr仪,且不需要进行后续产物分
析工作,扩增区、扩增产物分析区可合并。若使用样本处理、核酸提
取及扩增检测为一体的自动化分析仪,则标本制备区、扩增区、扩增
产物分析区可合并。
,各区域无论是在空间
上还是在使用中,应当始终处于完全的分隔状态。不应只是形式上的
分区,不应一个区域嵌套一个区域。
。扩增区与扩增产物分析区各区
域宜采用独立直排方式出风。
采用空调机组方式的,pcr实验室应当具备独立空调机组;同时
应当考虑停机后各房间空气连通的可能性,采取必要的控制措施。
→标本制备区→扩增区→扩增产物分:.
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析区方向空气压力应当以递减的方式进行,使得pcr检验实验室的空
气流向应当按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产
物分析区方向进行,防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。
空气流向应当为单向,禁止下游污染上游。应当设置合理的压差
梯度,并安装压差监测装置,以有效证明空气流向,压差梯度不宜低
于5帕。
,缓冲间内通向内实验室和走廊的门应当安装连
锁装置或采取相应措施,避免出现两个门同时打开的情况。
(不建议使用电子连锁方式)
传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
若设置传递窗,应当为双侧开门,要求密封严实,并且两侧的门应当
为互锁装置或采取相应措施保证两侧门不会同时开启。
理想的pcr实验室布局图:
8、洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,
这是有规定的。
9、在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,
空气通过回风口向室内换气。
10、主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝
合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结
构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜
采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;:.
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地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
11、在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外
灯,供消毒用。在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯,对
实验桌进行局部消毒。天津市临床检验中心需按照《医疗机构临床基
因扩增检验工作导则》对医疗机构临床基因扩增检验实验室的检验质
量适时进行督查,并将检查结果上报卫计委。
第三篇:pcr检验实验室检查要点指南pcr检验实验室检查要点
指南
xx年8月31日,北京市食品药品监督管理局发布了《pcr检验
实验室检查要点指南(xx版)》,具体内容如下:
聚合酶链反应(pcr)检验实验室检查要点指南(xx版)
聚合酶链反应检验实验室是指通过基因扩增的方式检测特定的
dna或rna的检验实验室。聚合酶链反应(polymerasechainreaction,
pcr)是一种在体外特异性扩增靶dna序列的技术,其基本过程为模
板双链dna的变性、引物与模板dna的退火和在dna聚合酶引导下的
链延伸反应三个阶段的多次循环。每一次循环后的扩增产物均可作为
下一轮循环的模板,理论上,扩增产物量呈指数形式上升,即经过n
个循环后,产物量增加到2n倍。pcr试剂操作简单,短时间内在体外
可获得数百万个特异靶dna序列的复制,为临床疾病的诊断、治疗监
测和预后评估提供了一种极有帮助的实验室辅助手段。
pcr检验实验室是pcr试剂生产企业在产品检验过程中不可缺少
的工作环境,其环境控制水平和质量管理水平直接影响着最终产品是:.
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否合格,能否放行。由于该产品本身的特殊性,《医疗器械生产质量
管理规范附录体外诊断试剂》、《医疗器械生产质量管理规范体外诊断
试剂现场检查指导原则》条款中,明确对pcr试剂的生产和检验环境
做出规定。此外现行卫生行业的法规、标准以及相关文献中对于pcr
检验实验室均作出规定,主要涉及《全国临床检验规程》(第三版)、
《医疗机构临床基因扩增管理办法》(卫办医政发〔xx〕194号)、《医
疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》及《临床诊断中聚合酶链
反应(pcr)技术的应用》(ws/t230-xx)等行业标准的相关要求。本
检查指南旨在帮助北京市医疗器械监管人员增强对pcr检验相关过程
的认知和把握,指导全市医疗器械监管人员对pcr检验实验室设计建
设与质量控制的监督检查工作。同时,为pcr试剂生产企业在pcr检
验实验室的设计建造和管理要求提供参考。
当国家相关法规、标准、检查要求发生变化时,应当重新讨论以
确保本检查指南持续符合要求。适用范围
本检查指南可作为北京市食品药品监督管理局组织、实施的体外
诊断试剂产品注册质量管理体系现场核查、《医疗器械生产许可证》
现场核查、医疗器械生产监督检查等各项涉及pcr检验实验室检查的
参考资料。
基因测序检验实验室等涉及pcr试剂的相关部分应当参照本检查
指南执行。核查要点
(一)现场查看生产企业pcr检验实验室布局
生产企业应当提供pcr检验实验室设计方案和/或平面设计图(应:.
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当标明风向或压差梯度)。
或空间内,保证空气不直接联通,防止扩增时形成的气溶胶造成交叉
污染。
。试剂储存和准备区、
标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。根据使用仪器的功能,区域
可适当合并。若使用实时荧光定量pcr仪且不需要进行后续产物分析
工作,扩增区、扩增产物分析区可合并。若使用样本处理、核酸提取
及扩增检测为一体的自动化分析仪,则标本制备区、扩增区、扩增产
物分析区可合并。
,各区域无论是在空间
上还是在使用中,应当始终处于完全的分隔状态。不应当只是形式上
的分区,不应当是一个区域嵌套一个区域。
。扩增区与扩增产物分析区各
区域宜采用独立直排方式出风。采用空调机组方式的,pcr检验实验
室应当具备独立空调机组;同时应当考虑停机后各房间空气连通的可
能性,采取必要的控制措施。
→标本制备区→扩增区→扩增产物分
析区方向空气压力应当以递减的方式进行,使得pcr检验实验室的空
气流向应当按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产
物分析区方向进行,防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。空
气流向应当为单向,禁止下游污染上游。应当设置合理的压差梯度,:.
精品文章
并安装压差监测装置,以有效证明空气流向,压差梯度不宜低于5帕。
,缓冲间内通向内实验室和走廊的门应当安装连
锁装置或采取相应措施,避免出现两个门同时打开的情况。
,应当为双侧开门,要求密封严实,并且
两侧的门应当为互锁装置或采取相应措施保证两侧门不会同时开启。
(二)现场查看仪器设施配置
:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩
增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。配
套用品一般应当包括:
(1)温度调控范围为2℃~8℃和(或)-20℃以下冰箱;(2)混
匀器;(3)微量加样器;(4)紫外消毒设备;
(5)消耗品。一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头;
(6)专用工作服和工作鞋(套);(7)专用办公用品。
:核酸(rna、dna)提取、贮存及加样。配
套用品一般应当包括:
(1)温度调控范围为2℃~8℃和(或)-20℃以下冰箱;(2)高
速离心机;(3)混匀器;
(4)水浴箱或加热模块;(5)微量加样器;(6)紫外消毒设备;
(7)生物安全柜;
(8)消耗品:一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头
(带滤芯);
(9)专用工作服和工作鞋(套);(10)专用办公用品;:.
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(11)如需处理大分子dna,应当具有超声波仪。
:cdna合成、dna扩增及检测。配套用品一般应
当包括:(1)核酸扩增仪;(2)微量加样器;(3)紫外消毒设备;
(4)消耗品。一次性手套、一次性帽子、耐高压处理的离心管
和加样器吸头(带滤芯);(5)专用工作服和工作鞋;(6)专用办公
用品。
:扩增片段的进一步分析测定。视检验
方法不同而定,基本配置如下:(1)微量加样器;(2)紫外消毒设备;
(3)消耗品。一次性手套、一次性帽子、加样器吸头(带滤芯);
(4)专用工作服和工作鞋;(5)专用办公用品。
应当建立设备维护保养规程,计量设备应当定期检定。例如核酸
扩增仪、微量加样器、生物安全柜、离心机应当每年进行检定或校准
工作。
(三)现场检查工作流程及注意事项
,即试剂储存和准
备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区。
,不同工作区域内的设备、物品
不得混用。
,不得混用(例如可以采
用不同颜色)。
→标本制备区→扩:.
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增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的
清洁用具并防止交叉污染。实验垃圾属于医疗废物的应当按照《医疗
废物管理条例》相关规定进行处理。
,应当立即对工作区进行清洁及消毒。
剂贮存和准备区,不能经过扩增检测区。应当对加样吸头、pcr反应
管等消耗品处理,防止污染。试剂盒中的阳性对照品及质控品应当保
存在标本处理区。试剂应当使用分子生物学级别试剂,使用的纯化水
应当高压灭菌。质检用于原辅料、半成品、成品检验用的pcr反应试
剂应当有相应的质量标准及操作程序。
,加入待测核酸后,应当盖好含反应
混合液的反应管。应当注意pcr反应液加样的顺序,应当为空白样品
→阴性对照→样品→阳性对照。对具有潜在传染危险性的材料,应当
在生物安全柜内开盖,并有明确的样本处理和灭活程序。
,尽量减少在扩增区内的走动,扩
增反应管不得在扩增区打开。
溴化乙锭、丙烯酰***、甲醛或放射性核素等,应当注意实验人员的安
全防护。
(四)现场检查人员培训情况
参与pcr检验的工作人员应当具备相应的专业知识和技能,包括
能熟练操作相关设备,明确整个工作的流程,掌握出现污染情况的处:.
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理方法以及实验室质量控制方法和检测结果的解释。
检查人员可以通过询问或要求人员实际操作对其进行评价,也可
以通过查阅人员培训记录,对其进行评价。
(五)现场检查文件情况
在检查过程中应当特别注意现场查看、询问、记录的实际情况与
生产企业的文件规定、记录的符合性。
图a和图b所给出的pcr检验实验室设置图是较为理想的设置模
式,建议企业参照此种模式设计并建立实验室。
第四篇:pcr检验实验室检查要点指南(征求意见稿)pcr检验实
验室检查要点指南(征求意见稿)
pcr检验实验室是指通过基因扩增的方式检测特定的dna或rna
的检验实验室。聚合酶链反应(pcr)是一种在体外特异性扩增靶dna
序列的技术,其基本过程为模板双链dna的变性、引物与模板dna
的退火和在dna聚合酶引导下的链延伸反应三个阶段的多次循环。每
一次循环后的扩增产物均可作为下一轮循环的模板,理论上,扩增产
物量呈指数形式上升,即经过n个循环后,产物量增加到2n倍。pcr
操作简单,短时间内在体外可获得数百万个特异靶dna序列的拷贝,
为临床疾病的诊断、治疗监测和预后评估提供了一种极有帮助的实验
室辅助手段。
pcr检验实验室是pcr试剂的生产企业在产品检验过程中不可缺
少的工作环境,其环境控制水平和质量管理水平直接影响着最终产品
的是否合格,能否放行。由于该产品本身的特殊性,《医疗器械生产:.
精品文章
质量管理规范附录体外诊断试剂》和《医疗器械生产质量管理规范体
外诊断试剂现场检查指导原则》的条款中,明确对pcr试剂的生产和
检验环境做出规定。本检查指南旨在帮助北京市医疗器械监管人员增
强对pcr检验相关过程的认知和把握,指导全市医疗器械监管人员对
pcr检验实验室设计建设与质量控制的监督检查工作。同时,为pcr
类体外诊断试剂产品生产企业在pcr检验实验室的设计建造和管理要
求提供参考。
本检查指南主要以现行医疗器械和卫生行业的法规、标准以及相
关文献中对于pcr检验实验室的规定为基础,尤其是以《全国临床检
验规程》(第三版)的相关要求为主,部分借鉴了《医疗机构临床基
因扩增管理办法》(卫办医政发〔xx〕194号)、《医疗机构临床基因扩
增检验实验室工作导则》、《临床诊断中聚合酶链反应(pcr)技术的
应用》(ws/t230-xx)等行业标准的相关要求,旨在帮助北京市医疗器
械监管人员增强对pcr检验实验室的认知和掌握,同时为体外诊断试
剂生产企业开展pcr检验实验室管理活动提供参考。
当国家相关法规、标准、检查要求发生变化时,应当重新讨论以
确保本检查指南持续符合要求。
一、适用范围
本检查指南可作为北京市食品药品监督管理局组织、实施的体外
诊断试剂产品注册质量管理体系现场核查、《医疗器械生产许可证》
现场核查、医疗器械生产监督检查等各项涉及pcr检验实验室检查的
参考资料。:.
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基因测序检验实验室等涉及pcr实验的相关部分应当参照本检查
指南执行。
二、检查要点及流程
以下检查要点的表述主要分为对现场情况和文件资料的检查两
部分,但在实际检查过程中应当特别注意现场查看、询问、记录的情
况与企业的规定、文件、记录的符合性。
(一)现场查看企业pcr检验实验室布局
企业应当提供pcr实验室设计方案和/或平面设计图(应当标明
风向或压差梯度)。
或
空间内,保证空气不直接连通,防止扩增时形成的气溶胶造成交
叉污染。
。试剂储存和准备区、
标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。根据使用仪器的功能,区域
可适当合并。
若使用实时荧光定量pcr仪且不需要进行后续产物分析工作,扩
增区、扩增产物分析区可合并。若使用样本处理、核酸提取及扩增检
测为一体的自动化分析仪,则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区
可合并。
,各区域无论是在空间
上还是在使用中,应当始终处于完全的分隔状态。不应只是形式上的:.
精品文章
分区,不应一个区域嵌套一个区域。
。扩增区与扩增产物分析区各区
域宜