文档介绍：湖南师范大学
硕士学位论文
姓名:宋琴
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:陈平
20100501
摘要神经干细胞巧窬低持心芄蛔晕腋虏⒕哂卸嘞蚍只潜能的细胞,在一定条件下能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。由于其具有高度的自我更新能力、低免疫源性、多潜能分化、迁移功能及良好的组织融合性等特性,因此可以作为基因或药物治疗载体以及修复许多中枢神经系统损伤或疾病。寻找参与神经干细胞分化相关新的信号通路,弄清神经干细胞多能性晕腋禄蛟鲋维持及分化所涉及的机制是神经干细胞研究的重要领域之一。神经干细胞在自我更新和分化的过程中,细胞质膜蛋白质作为外界微环境改变引起胞内信号传导的起始部位,起着举足轻重的作用。存在于细胞膜上的各类离子通道,抗原分子,及表面受体在细胞增殖、迁移、凋亡和分化过程中起着非常重要的作用。本实验旨在研究神经干细胞的质膜蛋白质。神经干细胞是在小鼠原代小脑的神经干细胞中转入蚬菇ǔ傻挠郎窬上赴怠T擞盟喾椒获取神经干细胞的质膜,将质膜经裂解液裂解后进行缬荆酶解,最后通过—/质谱分析鉴定以及生物信息学分析,共鉴定得到了鲋誓さ鞍字省F渲凶T说鞍字屎孔疃啵罅康氖芴濉信号分子、酶类等也得到了鉴定。许多蛋白质疕扔肷窬上赴脑鲋秤敕化密切相关。本实验首次对神经干细胞的质膜蛋白质进行鉴定和分析,此数据对神经干细胞的增殖与定向分化以及退行性疾病修复等方向的研究提供了应用价值。细胞膜蛋白中大部分都是经过糖基化修饰的蛋白质,糖链如细胞珻
表面的天线,成为细胞相互识别、粘着、信号接收、通讯联络、免疫应答等的分子基础,已知的多种疾病标志性分子和重要的抗体分子都是膜糖蛋白。目前通过富集质膜的方法结合质谱及数据库搜寻得到的多为一些丰度较高的蛋白质,细胞表面糖基化蛋白这样的低丰度蛋白则较少得到可靠鉴定。因此,从复杂的生物样品体系中富集糖蛋白/糖肽是蛋白质糖基化研究的重点和难点。本文中,运用细胞表面蛋白捕获技术珻—陨窬上胞表面糖蛋白进行富集和鉴定。利用此方法共鉴定到了非冗余糖肽有酰杂τ鎏腔奘蔚鞍字始个糖基化位点,其中有%的糖基化位点,包括等等一些与神经干细胞增殖分化及神经疾病修复密切相关蛋白质的糖基化位点,为本实验鉴定确认的新的糖基化位点。很多低丰度的受体蛋白及分子蛋白如珻,等等均得到鉴定。本工作首次构建神经干细胞的膜糖蛋白数据,得到了许多与神经干细胞增殖与分化以及退行性疾病修复相关的蛋白质,细胞表面糖蛋白的鉴定对于神经干细胞在这些方向的研究提供了重要信息;鉴定到了个分子,有助于发现新的神经干细胞表面标志物;并且,在这个糖蛋白中,仅有个蛋白质与利用双水相方法提取质膜所得的鲋誓さ鞍紫嗥ヅ洌虼私徊讲钩淞松窬上胞质膜蛋白质数据。关键词:神经干细胞;质膜蛋白质组;糖基化位点;细胞表面蛋白捕获技术、、,
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琳日期砂卜年挛豸兹绎界莺⒈C芸冢凇杲饷芎笫视帽臼谌ㄊ椤,器湖南师范大学学位论文原创性声明湖南师范大学学位论文版权使用授权书日期:为’年‘月如日本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。如日研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南师范大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。者师作导学位论文作者签名:‘月本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,本学位论文属于⒉槐C芏凇朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉皛/名名签签∥⋯么,馡.