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过敏原特异性IgE抗体检测试剂
技术审查指导原则
本指导原则旨在指导注册申请人对过敏原特异性IgE抗体Allergen-specificIgE检测试剂注册申报资料的准备及撰写,同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考;
本指导原则是对过敏原特异性IgE抗体Allergen-specificIgE检测试剂的一般要求,申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用,若不适用,需具体阐述理由及相应的科学依据,并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化;如申请人认为有必要增加本指导原则不包含的研究内容,可自行补充;
本指导原则是供申请人和审查人员的指导文件,不涉及注册审批等行政事项,亦不作为法规强制执行,如有能够满足法规要求的其他方法,也可以采用,但应提供详细的研究资料和验证资料;应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则;
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的,随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展,本指导原则相关内容也将适时进行调整;
一、范围
I型过敏反应性疾病相当普遍,人群总发病率高达10%~30%,是当前世界性的重大卫生学问题,被世界卫生组织WHO列为二十一世纪重点防治的三大疾病之一;
过敏性疾病是患者吸入、食入或者注入含有致敏成分的物质称为过敏原或变应原,Allergen后触发机体的B细胞产生特异性免疫球蛋白EImmunoglobulinE,IgE,IgE以其Fc段与肥大细胞或嗜碱性粒细胞的表面相应的FcεRI结合,使机体处于对该过敏原的致敏状态;当相同过敏原再次或多次进入致敏机体时,可与肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面的IgE发生特异性结合,当过敏原与致敏细胞表面的两个或两个以上相邻的IgE结合时,发生FcεRI交联,使肥大细胞和嗜碱性粒细胞活化,导致细胞脱颗粒并释放储存在细胞浆颗粒里的炎性介质——组***,并通过花生四烯酸途径合成新介质——白三烯、免疫反应性前列腺素和IL4、IL5等细胞因子及趋化因子,从而引发过敏反应或称变态反应,Allergy的疾病及相关症状,如过敏性哮喘、枯草热、荨麻疹、过敏性鼻炎、湿疹、结膜炎及胃肠道I型过敏性疾病及严重过敏反应等;
上述过敏性疾病的发生,IgE抗体起关键作用;I型过敏反应性疾病的特征是患者体内循环血液中的过敏原特异性IgE抗体浓度较正常状况下高,且特异性IgE抗体浓度越高,诊断过敏性疾病的概率越高;
本指导原则适用于过敏原特异性IgE抗体检测试剂,包括总IgE和特异性IgE,同时适用于不同的检测方法原理;
本指导原则适用于申请产品注册和相关许可事项变更的产品;
二、基本要求
一综述资料
综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、有关产品主要研究结果的总结和评价以及同类产品在国内外批准上市的情况介绍等内容,其中同类产品上市情况介绍部分应着重从主要原材料、检出限、阳性判断值或者参考区间等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的主要区别,同时应对申报的每一个过敏原具体项目进行详尽的阐述,分别阐述每个过敏原的具体特点及相关信息;
综述资料的撰写应当符合体外诊断试剂注册管理办法国家食品药品监督管理总局令第5号以下简称办法和关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号以下简称44号公告的相关要求;
二主要原材料的研究资料
若主要原材料为申请人自己生产,其生产工艺必须稳定;如主要原材料源于外购,应提供的资料包括:供货方提供的质量标准、出厂检定报告以及申请人对到货后主要原材料的质量检验资料;
除上述内容外,建议申请人按照以下要求提交研究资料:
、定值过程;详细阐述参考品中过敏原特异性IgE抗体的鉴定方法和浓度确认方法,鉴定方法应科学合理并采用国际公认的方法、金标准方法或临床诊断等方法综合进行确认;浓度确认应采用国家或国际标准品进行溯源;应分别对每一个过敏原项目进行研究;
、定值过程应参照企业内部参考品的制备方法进行;
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1无论是天然提取抗原,还是基因工程重组抗原,均应对原料进行详细分析研究,至少包括主要过敏原致敏蛋白的特异性、分子量、纯度、致敏蛋白含量、反应性:生物活性,效价抑制试验等内容;
2对于以上要求的指标应给出具体的研究方案、研究方法、实验过程、试验数据、相关图谱等内容;
3如为自制抗原,还需提供详细的抗原鉴定、提取、制备、生产等的研究资料;
4如为外购原材料,还需提供过敏原等主要原材料的出厂报告及进货检验报告;
5对于其他主要原材料,如二抗、工具酶、包被板等原材料,应提供主要原材料的选择、制备及质量标准等内容的详细研究资料及试验数据;
三主要生产工艺及反应体系的研究资料
,可用流程图方式表示,并简要说明主要生产工艺的确定依据;
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、每一步生产工艺的确认资料及试验数据;
、每一步反应体系的确认资料及试验数据;
四分析性能评估资料
申请人应提交在产品研制或成品验证阶段对试剂盒所有的分析性能进行研究的资料,对于每项分析性能的研究都应包括具体研究目的、实验设计、研究方法、可接受标准、实验数据、统计方法等详细资料;有关分析性能研究的背景信息也应在注册申报资料中有所体现,包括研究地点实验室、适用仪器、试剂规格、批号、临床样本来源等;分析性能研究的实验方法,可以参考国内或国际有关体外诊断产品性能评估的指导原则;
对于总IgE抗体的检测,不建议进行定性检测,应采用定量及半定量检测,所有分析性能也应根据定量或半定量检测试剂的要求进行评估;对于过敏原IgE抗体检测试剂,建议着重对以下分析性能进行研究;
、企业参考品的验证资料;
最低检出限的确定及验证应采用适当的参考品进行,最低检出限参考品应进行精确的浓度确认;对于定性检测产品,可采用每一浓度样本至少20次的检测情况对最低检出限进行研究,选取90%~95%检出率的浓度水平作为最低检出限;对于定量检测产品,可采用每一浓度样本至少10次的检测情况对最低检出限进行研究,选取CV值≤20%的浓度水平作为最低检出限;
过敏原特异性IgE抗体的检测限建议不高于ml,总IgE抗体的检测限建议不高于3~5IU/ml,可采用稀释或系列参考品的方式进行研究,但应保证不同浓度的样本同时包括上述两个浓度及其邻近的浓度,明确写明最低检出限邻近浓度的检测情况,如过敏原特异性IgE抗体浓度在ml水平的检测情况、总IgE抗体在阳性判断值附近浓度的检测情况;
对于包被过敏原为混合过敏原非组合的产品,应对可检测项目中的每一个过敏原项目进行最低检出限的评价及验证;
对于定量或半定量检测的试剂,均应当进行线性范围的研究;线性范围确定的研究应使用高值临床样本由可溯源至国家参考品/国际参考品的方法定量进行梯度稀释,稀释液应使用经确认为相应过敏原项目检测结果为阴性的混合人血清或血浆,建议应包含不少于9个浓度应包含接近最低检测限的临界值浓度,同时满足国家或国际分级标准的要求,通过评价一定范围内的线性关系及各水平的准确度确定该产品的线性范围;
对准确度的评价,可采用与国家/国际参考品的偏差、回收试验或者方法学比对等方法进行,申请人可根据实际情况选择合理方法进行研究;详细描述评价方法中样本的制备过程、评价方案、试验过程、试验数据、统计方法、研究结论等内容;
除上述资料之外,对于过敏原特异性IgE抗体检测试剂,建议提供至少50例与临床诊断结果比对的研究资料,对于极为罕见的过敏原特异性IgE抗体检测项目,可提供至少30例与临床诊断结果比对的研究资料;
精密度的评价方法并无统一的标准可依,可根据不同产品特征或申请人的研究****惯进行,前提是必须保证研究的科学合理性,具体实验方法可以参考相关的美国临床实验室标准化协会批准指南
CLSI-EP或国内有关体外诊断产品性能评估的文件进行;申请人应对每项精密度指标的评价标准做出合理要求,如标准差或变异系数的范围等;针对本类产品的精密度评价主要包括以下要求:
1至少应在产品检测阴性、最低检出限浓度、医学决定水平Cut-off值浓度进行精密度的评价;
①阴性样本质控品:应尽量采用高值阴性样本质控品进行n≥20,如最低检出限浓度为ml,可选择ml浓度作为评价样本浓度;
②最低检出限浓度样本质控品:待测物浓度应接近产品的最低检出限n≥20;
③医学决定水平Cut-off值浓度样本质控品:根据产品设计的Cut-off值确定样本质控品的浓度n≥20;
2合理的精密度评价周期,例如:为期至少20天的连续检测,每天至少由2人完成不少于2次的完整检测,从而对批内/批间、日内/日间以及不同操作者之间的精密度进行综合评价;如有条件,申请人应选择不同的实验室进行重复实验以对室间精密度进行评价;
1交叉反应
在进行交叉反应的研究过程中,对于过敏原的选择建议考虑以下内容:生物学分类的相近性、基因组或结构的保守性和同源性、过敏原蛋白AA序列以及立体结构的类同性、IgE抗体结合表位在构象/拓扑学的兼容性;
①应采用与被检过敏原蛋白在组成或结构上部分相同或者具有相近性的过敏原特异性IgE抗体阳性样本进行交叉反应研究;
②建议采用高浓度的过敏原特异性IgE抗体阳性样本进行交叉反应研究,应明确抗体浓度;
③申请人应对进行交叉反应研究的过敏原特异性IgE抗体阳性样本的确认方法进行详细阐述,并提供详细的确认资料和数据,如:是否经过其他方法检测、经过金标准的确认或经过临床诊断的确认等;
④亦可采用抗原电泳分析致敏蛋白的方法进行研究;
至少应对公认的可能具有交叉反应的过敏原项目进行验证,建议对于每种过敏原至少选取2~3个可能产生交叉反应的过敏原进行研究;
2干扰物质
①对样本中常见的内源性干扰物质进行研究,如血红蛋白、甘油三酯或胆固醇、胆红素、类风湿因子RF、抗核抗体ANA、抗线粒体抗体AMA等,确定可接受的干扰物质极限浓度;
建议采用被测物阴性及最低检出限浓度对每种干扰物质的干扰影响进行评价;
②对高浓度的非特异性人IgA、IgG、IgM、IgD抗体阳性样本进行评价,建议采用被测物阴性及最低检出限浓度进行研究;
③对含有高浓度总IgE抗体的特异性IgE抗体阴性或弱阳性样本进行评价;
干扰物质研究的样本可采用临床或模拟添加样本进行验证,样本量选择应体现一定的统计学意义;
须采用高浓度过敏原特异性IgE抗体阳性血清进行梯度稀释后由低浓度至高浓度开始检测,每个梯度的稀释液重复
3~5份,对钩状效应进行合理的验证;应给出不会产生钩状效应的抗体最高浓度,并在产品说明书上明示对钩状效应的研究结果;
应提交详细的溯源性研究资料,该类产品有国际标准品,产品检测结果的量值必须溯源至国际标准品;对于企业内部参考品、标准品、质控品均应提供详细的溯源资料,包括溯源方案、溯源方法、溯源过程、溯源步骤,溯源过程中每一步的不确定度的计算等内容;
五阳性判断值或参考区间确定资料
对于过敏原特异性IgE抗体检测试剂,不同过敏原检测项目的阳性判断值可能不一致,因此应根据不同项目分别给出适于中国人群的阳性判断值,提供详细的研究资料;如将阳性判断值确定为ml或者按照国际或国家分级标准的不同级别对阳性判断值进行设定,则应当说明确定或者设定的具体依据,并提供详细的验证资料;
对于总IgE抗体检测试剂,应给出参考区间,应按照不同的年龄段分别进行参考区间的研究,并提供详细的研究资料;
六稳定性研究资料
稳定性研究资料主要涉及两部分内容,申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究;前者主要包括实时稳定性有效期、运输稳定性、开瓶稳定性等研究,申请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案;稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论;对于实时稳定性研究,应提供至少三批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的研究资料;
应对样本稳定性进行研究,主要包括室温保存、冷藏和冷冻条件下的有效期验证,可以在合理的温度范围内选择温度点温度范围,每间隔一定的时间段即对储存样本进行全性能的分析验证,从而确认不同类型样本的效期稳定性;适于冷冻保存的样本还应对冻融次数进行评价;
试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在说明书储存条件及有效期和样本要求两项中进行详细说明;
七临床评价资料
临床试验总体要求及资料内容应符合体外诊断试剂临床试验技术指导原则、办法和44号公告的规定,以下仅根据过敏原检测试剂的特点对其临床试验中应重点关注的内容进行阐述;
对于该类试剂已有同类产品上市的,按照法规要求应选择境内已批准上市、临床普遍认为质量较好的同类产品作为对比试剂,采用试验用体外诊断试剂以下称考核试剂与之进行对比试验研究,证明考核试剂与已上市产品等效;
如无已上市同类产品的,应根据产品设计的具体用途进行临床试验;综合临床检测结果、病例临床资料、其他检测检查结果病史、皮肤试验、激发试验、患者治疗情况等多方面因素进行综合判断以评价产品检测结果是否准确;
应充分考虑地域性差异,由于过敏原检测项目很多,包含各种食物、吸入性、注入性等过敏原,而且过敏症状的发生存在季节性,所以应充分考虑各种过敏原的地域性差异、发病时间的不同、流行病学的差异选择有代表性的单位进行临床试验,应尽量选择不同省分的临床单位;