文档介绍：复旦大学
硕士学位论文
大豆胰蛋白酶抑制剂Ti<'d>的原核表达及转基因研究
姓名:丁波
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:曹凯鸣
20030501
大翌胰蛋白酶抑制剂脑吮泶锛白;蜓芯要摘稠瑁犬耢:巛襻孕П泶锵低成诖篌糑⒁鹊绑高ヤ贪并利用亲和层析的方法纯化得到有抑制胰蛋内酶活性的灾刈镾的榷ㄐ跃掀倭栉榷坝胩烊籗送行了院较研究。结果袭疆重缀‘程商下具有更好的稳定性,预示了魑K游锱┮┗蚶米;蚍椒ㄌ麓菖湛柜半の呼钅枵壕啊E纾督撕嫒ǔれ佟峰鞅WU舸乐参镌靥澹利用农杆菌介导的叶盘法转化烟萆,获得了转基网烟草。对代转基因烟草帮莆碥砭希帷R丫岬阶;戊哝荇涓骰很慈旆关键词:麓组大氨胰蛋白酶抑制剂:稳定性;抗嗽:转基因了表达。复盥大学硕士学位论文
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综述作用】。这些早期结果提示人们,植物鬣白酶抑制剂可熊是一种新的抗斑物质。麸藏以麓,入稍嚣始了瓣擅携蛋白酶搀铡裁莪塞捧瘸戆磷究。凌囊钵猿提下,蛋白酶抑制剂可以抑制某些昆擞肠道的蛋白酶活性,;而活体试验表明,已经被炎踅,嚣对予其抗虫鹃分予机制黥职究饔捐当大~部分王作集中谯转蒸闵植物上,已经培育出了抗虫烟草、水稻及小麦等转基阻值物。~、植物蛋白酶抑制剂的分类自然晃共发现四丈炎蛋白酶抑制荆:丝氨酸蛋白酶掷制剂、簸基蛋臼酶抑得最多的。在禳物中,熊氨酸鬣自酶并不是用柬穴蕊模降解蛋蠢质的,因此,植物中食有丝氨酸蛋白酶抑制刹的存在并不是调带内源性蛋白酶活性。棚反的,动物体两酌丝氨酸蛋自懿捧铺裁主要侔瑙是摔秘维织串芊瓿汕痹谖O盏捏长期以来,各种病斑害给农业造成巨大的损失。目前,人们对农俸物的保护过分地依赖予化学农药,长期使用化学农药,不但选择压力会使害虫产生内在抗药髓,而鼠稚选择聪力会影晌害虫与天敌之闻的自然平衡。因此,进行生物农药蓐Ⅱ获得转基因抗性研究刻不容缓,而蛋融酶抑制剂基因憋候选的抗虫基因之一。本文将从穰秘蛋自酶撺翩帮睦嘈汀⑸砉δ堋表达调控及转纂因研究等方面对其国内外研究进展做一简单综述。稽物蛋蠢酶撩隶翠在拳令多灌纪彗王藤,天稍虢溪察蘩了檀凌鬃自酶拿牵髓裁黪撬虫传瓣。年和发现有些融虫的幼虫无法在大豆制品上正常生长,这些观察续莱谈褥珏睬荣勾瓜罅颂X秘坏绑徊灸戾梓镌幼汗却生长发育的研究。他们发现,大豆浸提物能使杂拟谷盗生长缓慢,发育不炎,弱瓣述检嚣裂犬要浸提蘩慰杂撅谷瓷绥虫疑邋蛋叁懿鸯捧裁酱喂食禽旁攘制裁戆人削酰壮孓胰∈踌嗫⑾韵落硐殖鲇Q吡迹虫体变轻,幼呶生长期增长等现象,。随着分子生物学的发展,一些基因铆荆、众属蛋自簿抻制剂和天冬氨酸蛋融酶抑制剂。⑺堪彼狩喟酌付及铩栋在摭物蛋白黪抑制剂中,丝氨酸蛋囱酶抑制;亲畛疽5模⑶乙彩茄芯炱旦大学硕士学位论文
源性蛋囱酶活健,如噙氍动物麓腺中的胰蛋自酶柿帝《翔。丝氨黢蛋自酶类如胰用【浚邪彼崧景酌敢种萍猎谛矶嘀种参镏写娉蹋饶酌敢种萍廖踝钗F酸许多昆虫瓣港铯滚孛,黪羯是鳞邂嚣崛÷丝甓酸蛋,在碱熬蕊范嚣逸,丝爨酸蛋巍簿稻金遵纪年戎人⒗砹俗采星荻舅康t鹊蚌勿霞韭什敏裕饕4嬖谟植物的贮藏器官特别是种子中,其含量常常高达总蛋白的%】。经过对它们结麴和燃震熬联究,发瑗这些掷铡裁可以分秀聪大类:荚孛一类必个分子豹姨蛋自酶,是一个双头搀裁裁;另一类必縤撩铡剡王分子属单头翔制荆【】。这两类抻铡测均属典型丝懿羧蛋臼瓣抑制剂。在大豆种子种子中分离型大厦胰蛋妇酶抑制剂.,并获得并纯化结晶【之后展开的大豢研究表孵:。、被先后阐明。它们均含霭被岵腥唬寂┫嗤宦春卸蚣钚晕瓣毫泳逶移率不游子已期魏’、彳⑸籰。三释鬃鑫,经遗传努橇和菜蛰生健分蛋白酶⒁饶榈鞍酌⒌缘鞍酌仁粲一个蛋融酶超家族,在大多数黼等动物瀚滂纯邋降簿蚤爨质的糙始过稀中超遍戆。辕物中戆丝氨酸骚自酶搀杂枚汲赫⒕膊闷雔,其帮髑蛋鑫酶繇遵循相似的机理【。白酶类【浚馐鞍酌付寄鼙恍馨彼岬鞍酌敢种萍了种啤0菪矶嘧魑锖Τ豹鳞蘧瓣基虫鹣游晓遘瓣最逶属蛋白酶处于最佳的活性范围。抑制齐:肿恿吭嘉,含较多二硫键,一个抑制剂分子可以结合二童为,禽有二对:硫键,一个抑制剂分予可以结合一分予的胰蛋白酶,中,上述两类蛩臼酶抑制剂类型都有发现,其中嘈驮诖笞ぶ肿又泻孔丰富,特异掷制胰蛋白酶;丽型驻自酶掷制剂则对胰蛋囱酶、胰凝瑰蛋岛酶及弹性蛋自酶三种稽关的鬣自酶发嫩抑制。予年由首先从大豆,,等入发瑰大嚣种子蛋囱的提取钫经电泳后,出现傻分尉为#种萍恋腻ξ猅鸗,其中童然赛审普遍存在,两瓢臀鳌=仙倜亵纭U怄馭蹋瓵案痪病核缑芬布赢秀,在缀戏上有少耋差异。赵述文等吭诙晕夜余傍大豆资源的分析过獠中,⒍运囊恍┥纯