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年份
技术发展概要
1907年
Harrison创立体外组织培养法
1951年
Earle等开发了能促进动物细胞体外培养的培养基
1957年
Graff用灌注培养法创造了悬浮细胞史上绝无仅有的1×1010~2×1010cells/L的记录,标志着现代灌注概念的诞生。
1962年
Capstil成功地大规模悬浮培养小鼠肾细胞(BHK),标志着动物细胞大规模培养技术的起步。
1967年
VanWezel用DEAE-SephadexA50为载体培养动物细胞获得成功。
1975年
Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。
1986年
DemoBiotech公司首次用微囊化技术大规模培养杂交瘤细胞生产单抗获得成功。
1989年
Konstantinovti首次提出大规模细胞培养过程中的生理状态控制,更新了传统细胞培养工艺中优化控制之理论。
名称
价格(USD/kg)
用途
长春新碱
≦1000000
抗肿瘤药物
长春花碱
≦3500000
抗肿瘤药物
保加利亚玫瑰油
2000-3000
香料、调味品
毛地黄毒苷
3000
心机能障碍
辅酶Q-10
600
强心剂
***
650
麻醉剂、镇痛剂
紫草宁
4000
消炎、抗菌、染料
苦橙花油
1125
香料
吗啡
600
麻醉剂、镇痛药
当归根油
800
香料、中药
春黄菊油
500
香料、药物
茉莉
500-2000
香料
动物细胞培养
细胞培养是指离体细胞在无菌条件下分裂、生长,在整个培养过程中不出现分化,不再形成组织。
组织培养是指动物体系的某种组织,在体外培养时细胞一直保持原来已分化的特征,该组织的结构和功能持续不发生明显变化。
原代培养是指直接从有机体得到的组织或将其分散成细胞后开始的培养。
传代培养或再培养是转移部分初代培养物到新鲜培养基中的培养。
动物细胞培养与微生物培养区别
动物细胞无细胞壁,且大多数哺乳动物附着在固体或半固体的表面才能生长。
对营养的要求较高,往往需要多种氨基酸、维生素、辅酶、核酸、嘌呤、激素和生长因子等,其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供,在很多情况下还需加入10%的胎牛或新生牛血清。
动物细胞对环境敏感,包括pH、溶氧、温度、剪切应力都比微生物有更严的要求,一般须严格的检测和控制。
动物细胞生长缓慢,对环境条件要求严格。不仅需要严格的防污染措施,同时还要用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供养和调节pH。
原代培养:单个细胞十代左右
传代培养:原代培养细胞40~50代左右
细胞株:10到40、50代的细胞
遗传物质没发生改变
细胞系:超过50代的细胞,
遗传物质发生改变,可无限增值
注意界定原代培养和传代培养;细胞株和细胞系
已有商品市售无血清培养基主要游戏书3类:
基本合成培养基;
基本合成培养基加生长因子;
基本合成培养基加组织抽提物。
动物细胞培养方法和操作方式
一、动物细胞大规模培养方法
依细胞种类:
原代培养
传代培养
依培养基:
液体培养基
固体培养基
依培养器和方式:
静止培养、旋转培养
搅拌培养、为载体培养
中空纤维培养、
固定床或流化床培养