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微生物与免疫教研室
本次实验内容
实验一、双向免疫扩散试验
——LDL多抗鉴定及效价测定
实验二、免疫浊度测定
——免疫球蛋白检测
一、本次实验的目的:
1、掌握可溶性抗原制备抗血清鉴定的常用方法。
2、掌握双向免疫扩散试验方法。
3、掌握抗体效价的判断。
4、掌握免疫浊度的测定原理。
5、熟悉免疫球蛋白检测的临床意义。
沉淀反应(precipitation)
可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象。
分类
液体内沉淀试验
絮状沉淀试验
环状沉淀试验
免疫浊度测定
凝胶内沉淀试验
免疫扩散
免疫电泳
单向免疫扩散试验
双向免疫扩散试验
火箭免疫电泳
对流免疫电泳
沉淀反应
思考:抗原抗体反应的四大特点?
特异性可逆性
比例性阶段性
沉淀反应的特点
抗原为可溶性物质,如蛋白质、多糖
沉淀反应分两个阶段:
第一阶段、抗原抗体特异性结合(不可见)
第二阶段、形成可见的免疫复合物(可见)
条件
电解质,温度,酸碱度
凝胶内沉淀试验(gelphaseprecipitation)
主要是指琼脂糖扩散或称凝胶扩散(geldiffusion)。常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙稀酰***凝胶等。
★根据实验目的与方法不同,可将固相内沉淀验分为2类:
(一)免疫扩散①单向免疫扩散试验
(singlegeldiffusiontest)
②双向免疫扩散试验
(doublegeldiffusiontest)
(二)凝胶免疫电泳
(gelimmuno-electrophoresis)
火箭免疫电泳
双扩散免疫电泳
一、单向免疫扩散试验
(一)原理
将一定量的抗体混入琼脂凝胶中,使待测的抗原物质在凝胶中自由扩散,与抗体结合形成沉淀环,沉淀环的大小与抗原浓度呈正相关。