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褶纹冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表达及蛋白性质研究.pdf

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文档介绍

文档介绍:学位论文作者签名中:弓务求次签字日期:後龙欢月月廖年‘月步日学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书签字目期:砂少其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得直昌太堂或其他教育沙·阅。本人授权直昌太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特另;员曜⒑椭滦坏牡胤酵猓畚闹胁话机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊馀贪电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表,并通过网络向社会公众提供信息服务。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ学位论文作者签名中:导师签名中:签字同期:
摘要褶纹冠蚌∥/魑N夜匾5牡榘鲋唬资懿≡感染而发生疾病,育珠能力产生了较大的影响,因此开展其分子免疫的研究具有重要意义。超氧化物歧化酶芮宄镅趸讨兴钚匝而对细胞具有保护作用。本研究对褶纹冠蚌蚪辛丝寺『椭刈表达载体构建,并对重组基因在大肠杆菌中进行表达和纯化,测定蛋白活性及稳定性,并初步评估其功能。〕鲴尬乒诎鯟全长,将基因和表达载体璌盖兄螅樱建重组表达质粒。将重组质粒转入大肠杆菌校尤隝保同时加入或不加入/分别在进行诱导,采用亲和层析镍纯化蛋白的方法,对包涵体和可溶蛋白分别进行纯化和活性测定,并考察活性最高蛋白酶的热稳定性、稳定性和对变性剂的稳定性。用小鼠抗血清对诱导的融合蛋白进行分析抗原性。最后建立乙醇损伤细胞的模型,探讨对乙醇损伤人蜗赴谋;ぷ饔谩甈峁砻鳎嬗盏急泶锏牡鞍字饕J前逍问剑嬗导则能够产生可溶性蛋白,并且在补充有,时有助于可溶的产生。进一步的富钚苑治霰砻鳎还懿钩銫痁盏加敕瘢婧诱导的包涵体蛋白复性后活性都低于痬比诱导的包涵体蛋白活性低;盏疾目扇艿鞍酌富钚栽蛎飨陨撸钩銫痁导产生的酶活性最高,达痳,说明在低温培养及补充/时有利于可溶的体外诱导表达并且有利于其酶活性的提高。纯化的可溶性蛋白在温度和诨钚晕榷ǎ⒖赡褪。的尿素和サ氖榛蛩崮。制备鼠的多抗血清,经分析,目的基因谋泶锊锬芄槐皇蠖嗫寺】固逄匾煨允侗稹4送猓在乙醇损伤人蜗赴P椭校峁砻饔谢钚缘膔缚梢员;肝细胞免受氧化损伤。关键词:褶纹冠蚌:超氧化物歧化酶;表达;活性测定;赴.
一.—————————————————————————————————●———————————————————————————————~..,╃郔、”琱.,琣.,.琾甈℃,./.‘‘瑃Ⅱ
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缩略语表∞超氧化物歧化酶褶纹冠蚌超氧化物歧化酶氨基酸碱基对脱氧核糖核苷三磷酸酸千碱基千道尔顿信使光密度开放阅读框磷酸缓冲盐溶液聚合酶链式反应多聚腺苷酸末端快速扩增逆转录一聚合酶链式反应十二烷基磺酸钠0’末端链转换机制一氧化氮阴F咸烟前阴0谒卡那霉素ぁ·痚’、‘’口‘
姆大肠杆菌培养基聚合酶链式反应嗜热菌来源的酆厦异丙基硫代一狣肴樘擒猵聚丙烯酰胺凝胶电泳一三羌谆氨基甲烷】丙烯酰胺琋亚甲双丙烯酰胺过硫酸铵琋,琋’.四甲基乙二胺光密度吸光度小牛血清极限必需培养基腹腔接种巯基乙醇辣根过氧化物酶酶联免疫吸附实验磷酸盐缓冲液’,募谆1桨免疫球蛋白琋—琋,琋缩略语表瓸’’,痵疭畃.
目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯缩略语表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.Ⅳ目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..Ⅵ第一章综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯蠢嗝庖哐芯扛攀觥贝类的细胞防御机制⋯⋯⋯⋯.:⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。贝类的体液防御机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯趸锲缁富蜓芯肯肿础姆⑾帧弧闹掷嗪徒峁埂睦砘灾屎妥饔没怼骸幕钚圆舛ḿ坝跋煲蛩亍氧化酶对乙醇损伤肝细胞的保护作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯挠τ谩狙芯康囊庖濉!第二章利用甤泶锵低持票格尬乒诎鲋刈镃甋蛋白⋯⋯⋯⋯⋯..材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯!⒁⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。奶崛的合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

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