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培养基与生理特点
,比哺乳动物细胞约低10oC
,细胞本身就基本停止了生长繁殖
,在2~3天内分泌500mg/L(哺乳动物细胞5只产100500mg/L),目标蛋白质能占总蛋白的40%以上
昆虫细胞培养
哺乳细胞的工业应用
将目标蛋白基因能插入到杆状病毒(baculovirus)的基因组中,该病毒能非常高效地感染昆虫,从而形成一个表达重组蛋白的天然工厂。
昆虫细胞是可连续分裂的,可以无限制地分裂,细胞生长速度比哺乳动物细胞快得多,在实验室中,一种名称为BTI-EAA的昆虫细胞已经连续培养了15年以上。
昆虫病毒的基因修饰(或改造)比哺乳动物病毒容易得多
昆虫细胞株的建立
昆虫细胞培养的运用
一般不适于大规模生产重组蛋白、特别是医用重组蛋白质
可小批量生产重组蛋白或医用重组蛋白质,以满足临床前试验对数量的需要或掌握蛋白质分泌特性。也被称为医用蛋白质生产的桥梁
主要用于生物杀虫剂(昆虫病毒)生产,昆虫病毒已超过1000多株,涉及900多种昆虫
动物细胞培养的应用两个实例
Antibodyproduction抗体
Vaccine疫苗
治疗用抗体 TherapeuticAntibodies
最近开发出来的,多数处于第三期临床试验
大部分基于中国仓鼠卵巢细胞(CHO)
用量大(Highdose)
Hundredsmgtogmperdose
大量生产
500kg-1,500kg/yr
抗体的基础知识
单克隆抗体
多克隆抗体
Example1:单克隆抗体生产过程
细胞克隆的构建
培养基
流加培养的培养基
流加培养的策略
Example1:单克隆抗体的生产能力
大部分采用流加培养
少量采用灌流培养,生产效率较低
间歇5-7day,50-250mg/L
流加培养7-12day,300-600mg/L
最高的分泌量:两星期内1-3g/L
流加培养
每天流加的浓缩培养基(约5-7倍)
连续的自动流加
带pH控制的流加
时间程序控制的流加
由氧的需求量(OUR)来定,但不太现实
一般初始培养基仅为最大工作体积的40-50%