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宁夏农学院学报. .

枸杞髓部细胞悬浮培养及胚状体发生’
第年
曹有龙贾勇炯罗青高晓原
期宁裒辑瓦生≈劳术研究,银川,.
四翻学生物警系,陈棼,成都.’
摘要应用枸杞髓部组织进行离休培养,建立细胞系,诱导胚状体发生。结果在
舍不同激素的种培养基上都诱导出愈伤组织,诱导频率在. 一.
,其中以././蔗糖培养基诱导出的愈伤组
织颗粒小,分散性能好,此愈伤组织在—次继代培养后,转入液体培养基中进行振
荡培养,后获得大量单细胞,经过多玻鳢代培养,建立稳定的单细胞悬浮系。悬浮
细胞在液体培养基中,培养一可获得大量胚状休。雌集胚状体转移到
./的固体培养基上,胚状体能够萌发并开成大量蟓色小芽,小芽转入生
根培养基中得到完整植株。
关键词塑亟;墨兰生盎;体细胞兰墨兰;垫堡至生
中图分类号:
体细胞胚的发生是植物组织培养中形态建成的重要方式之一。通过体细胞胚发生方式形
成再生植株的过程,不仅能够充分说明植物细胞的“全能性”而且也由于具有繁殖速度快,繁殖
系数高,染色体稳定以及单细胞起源等特点而受到普遍关注,被认为是开展理论研究进行突变
体筛选及制作人工种子等方面的重要方法和技术:近十多年来,经过大量的实验研究,不仅诱
导多种植物的体细胞胚和再生植株,而且在基础理论和技术方法上也有了一些重大的突破和
进程,但有关体细胞胚发生的方式,诱导条件及形态学资料很有限。在枸杞方面,我国学者
牛德水等人通过枸杞下胚轴培养首次诱导出体细胞胚和再生植株,而且在培养过程中还发
现悬淳培养物中可以产生大量胚状体。本实验利用枸杞髓部细胞诱导愈伤组织,并进行悬浮培
养,研究了在悬浮培养条件下胚状体的发生的主要条件及过程,为体细胞胚的研究和应用提供
理论基础。
材料和方法
. 试验材料
供试材料为宁夏枸杞,是宁夏农林科学院枸杞研究所培育的高产
优质枸杞品种一宁杞号。
. 愈伤组织的诱导及继代培养
收稿日期,.一一
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取当年生长的明显分化成髓组织的枝条,摘除叶子、侧芽和带有分生组织的顶端,
把外植体的切端蘸熔蜡封着伤口,然后浸泡在酒精中,再转入. 。溶液中
—,无菌水冲洗次,最后用吸水纸吸千,用解剖刀从茎的两端各切除,余下部分
切成的小段,用瓶塞打孔器从切段中取出圆柱体髓组织并将其转移到的无菌培
养皿中,甩解剖刀切成~ 厚的小圆片,接种到、、、四种含不同激素的固
体培养基上。
在培养基中加入/的水解酪蛋白作为继代培养的培养基,挑选色泽鲜艳、生长
迅速的愈伤组织进行继代培养,每次,—次继代后,出现疏松颗粒状胚性愈伤组织,选择
。当愈伤组织松散易脆、颗粒均
匀且生长迅速时,改为周次保存之。
. 单细胞的分离及悬浮培养
取鲜重一颗粒状愈伤组织,置于盛有液体培养基的三角瓶中,用无菌
玻璃棒将愈伤组织压碎,然后放在摇床上摇散。后,用目尼仑网过滤,除去愈伤组织碎
片及较大的细胞团,再经/的速度离心去掉上面的碎渣,加一定量的液体培养
基制成细胞悬浮藏,调节密度使其为个/,用于髓部细胞悬浮培养的培养基与继代培
养的培养基相同,只是不加琼脂,摇床振