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标记免痤分析与临床年第卷第期
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核酸探针在生物医学中的应用与发展
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王金良也,
棱酸基园探针是经某种标记物标记过的单链序列复制及复制酶反应等手段结合应用,已
和,它能与解链后的靶或进成为遗传学、法医学、俦染病诊断及环境科学的重要
行杂交。凡是具有互补棱苷酸序列的核酸可以杂交研究手段。现仅就其近年的发展俄一简介。
一
其杂交信号可依标记物的特性而检出。凡不具互补、核酸探针所用的标记物
核苷酸序列者则不能杂交,故不能检出杂交信号。棱探针标记物已由放射性同位素、酶、荧光素扩展
酸杂交可有多种组合,如· 到化学发光物,镧系元素等主要标记物与标记方法
· 】】。杂交信号的检出也有多种形见表。
式。它与,连接酶链反应自身持续
表核酸探针的标记物
注缺口平咎聚合醇健反应随机引物标记;,柬埔标记
作者单位。天津津城敲免分析检中心天津
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二、核酸杂交的类型的标记物被保留下来可发光,最后测定发光,这种光
.固相杂交参与反应的一条核酸片段先固定与杂交探针的量成比例图
于固相支持物上,另一条反应核酸片段游离在溶藏
日
中固相支持物有硝酸纤维紊膜、尼龙膜、微孔塑料———土,
标记押
板磁珠和胶乳颗粒等。固相杂交的类型又可分为;
集落原位杂交越蠢
斑点杂交
淘槽杂交
印迹杂交
印迹杂交. ■
组织细胞原位杂交
.液相杂交核酸探针和靶链在液体

交探针,故应用不广近年来出现新型的液相杂交技
术有
髓量转移法应用两个紧接的探针一个探
针用化学发光基团标记,另一个用荧光物质标记。当图吖啶酯标记杂交试验
探针与特异的靶核馥杂交后,二个紧接韵探针可相
.夹心杂变法可分为固相和藏相杂交。
互暇弓而发光,具有较好的灵敏度和特异性。

链置换法短的片段预先杂交剜长
。。。用微孔板杂交可直接
的探针序列上,再与靶杂交,如二条
与技术配台应用,可同时操作~份样品,
链呈互补,可将置换下来,溶液中
杂交结果容易定量,加样、漂洗和读结果等步骤可以
经酶促降解,生成,再经酶促反应而发光。发光
自动化。
程度与被置换下的量成正比,也即与两条
藏相夹心杂交
链的互补程度成正比。见圈。
.亲和杂交;该试验保持了固相夹心杂交的高
度特异性。应用亲和吸睡可将杂交和未杂交的检测
———皿
探针分开。检测探针可用放射性同位紊、半抗原、荧
光紊或化学发光基团标记。吸酣探针可用生物素标
记,井使其吸附在亲和紊包被的固相支持物上。
在靶棱酸存在下,两个探针与靶杂交,形成夹心
,』皿皿皿”结构,杂交完成后,杂交物可移到带有固相支持物的
事苛
试管或凹孔中,杂交物上的吸酣探针可结合到固相

嚣、【检测探针可产生有用的测定信号。用生物紊标记吸
附探针,用’标记检测探针,这个系缱的灵敏茛可
砒·上达到检测出靶分子若直接用铕结合代替”
,灵敏度为× 靶分子