文档介绍：中的应用研究高灵敏功能化荧光核酸探针在生化分析昱椒毂谛返湖南大学博士学位论文堂鱼虫价搪ㄏ荩黄置王扭壁熬逡淫赶丛熬援墙丝堂垡王堂院童刍坌扭丝堂诠窒握童旦塑垫丝墨迨塞筌趱旦期;签拔浠峁玮郏皇陛辉绞学密级:菱堕焦些趁号:蔓二
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刷程辄锄铤谛挛作者签名:嗲昔作者签名:专著湖南大学学位论文原创性声明学位论文版权使用授权书晁暝鹿辏萝迹本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于⒈C芸冢年解密后适用本授权书。⒉槐C芸凇朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉按纾日期:日期:
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要摘准确和灵敏地获取生物样品中小分子、核酸、蛋白质和细胞的相关信息对生物医学研究以及临床诊断和治疗都具有十分重要的意义。功能化荧光核酸探针,其功能超出了核酸传统的基因角色,受到广大研究者越来越多的关注,但是,如何获得更高的灵敏度,如何提高抗复杂环境干扰的能力,如何实时、动态、灵敏、准确地获取生命活动相关信息,仍然是分析化学工作者所面临的重大挑战。本论文瞄准上述挑战进行研究,基于分子识别和信号放大技术发展了一系列分别以小分子、核酸、蛋白质和癌细胞为检测对象的新型功能化荧光核酸探针,主要内容包括:⒄沽艘恢只谟ü夤舱衲芰孔R坪土粗没环糯蠹际醯暮怂崾侍逄秸用于小分子可卡因的高灵敏检测。在此,含有核酸适体的发夹探针的吮昙怯光受体锏’端标记荧光供体焙怂崾侍逵肟煽ㄒ蚪岷匣岬致其构型发生变化从而打开发夹结构,引物便可以与打开的发夹探针杂交,在聚合酶作用下引物延伸成与发夹探针序列完全互补,产生新的双链使得供体和受体靠近发生荧光共振能量转移,同时可卡因被引物延伸的链竞争下来变成自由的可卡因分子,又可以与另外一条核酸适体结合,不断循环实现信号放大。该方法可以在诖锏的检测下限,选择性良好。⒄沽艘恢只谲偶し⑻厶搴驮咏涣词椒糯蠹际醯暮怂崽秸胗糜母吡槊艏觳狻J紫榷粤礁龇⒓刑秸肓蕉朔直鸾熊欧肿颖昙牵捎诜⒓探针粘性末端的长度使得两端的芘分子以单体形式存在,当目标シ⒃咏链式反应发生后,会形成一条长的带缺口的双链,使大量的芘分子以二聚体的形式存在。通过稳态荧光分析和时间分辨荧光测量技术可以实现缓冲溶液和复杂生物样品中母吡槊艏觳狻@酶梅椒ㄔ诨撼迦芤褐卸訢的检测下限可以达到⒄沽艘恢只谲偶し⑻厶搴途赫从Φ暮怂崾侍逄秸胗糜谌搜清中溶菌酶的高灵敏检测。该体系中含有一条两端标记芘分子的发夹探针和一条未标记的核酸适体:当没有目标分子时,两条链部分杂交可以使发夹探针打开,芘分子以单体形式存在;而当存在目标分子时,目标分子结合核酸适体并以竞争的方式将芘分子双标探针挤开,被挤开的探针呈发夹构型,使得芘分子以二聚体形式存在。我们结合稳态和时间分辨荧光测量技术可对缓冲溶液或血清中的溶菌酶进行检测。该方法在缓冲溶液中对溶菌酶的检测下限可以达到。利用该方法还实现了募觳猓得髡馐且恢滞ㄓ玫募觳夥椒ā。高灵敏功能化荧光核酸探针在生化分析中的应用研究
标;当有靶细胞存在时,核酸适体与其结合形成核酸适体/靶细胞复合物,导致⒄沽艘恢只诜肿有疟旰腿笨堂感藕欧糯蠹际醯暮怂崾侍逄秸胗糜目标细胞的高灵敏检测。一段能打开分子信标的单链牒怂崾侍逶咏恍纬核酸适体/单链春衔铩5泵挥邪邢赴嬖谑保チ碊不能打开分子信原来的双链结构分散并将单链头懦隼础1皇头诺牡チ碊序列含有缺刻酶的识别位点,当其与分子信标结合以后,缺刻酶会将分子信标切开,单链婕从挚梢杂胄碌姆肿有疟暝咏弧R哉庵址绞剑刻醯チ碊可以多次循环使多个分子信标被切开,从而实现信号放大。利用该方法检测赴以达到痬募觳庀孪蓿姨匾煨粤己谩⒄沽艘恢只谌搜9苌伤亟榈冀胂赴暮怂崾侍逄秸胗糜谠銮光动力学治疗的效果。合成并表征了光敏剂昙堑难9苌伤睾怂崾侍澹血管生成素特异结合以后,在目标细胞膜表面受体蛋白的介导下进入目标细胞,经过特定波长光照后,せ钪芪У难醴肿颖涑傻ヌ踅勘晗赴彼馈=峁显示该方法具有较高的光动力学的治疗效果。关键词:功能化荧光核酸探针;发夹型探针;核酸适体;信号放大;芘激发态二聚体博士学位论文