文档介绍：组织培养和分子细胞学技术. , 1995年8月出版
细胞培养司徒镇强主编. 世界图书出版公司, 1996年出版
体外培养的原理和技术. 薛庆善主编. 科学出版社, 2001年1月出版
动物细胞培养——基本技术指南(中译).章静波等译. 科学出版社, 2004年10月出版.
Human Cell Culture Protocols (2nd Ed). Joanna Picot. Humana Press, October 2004.
Basic Cell Culture Protocols (3rd Ed). CD Helgason, CL Miller. Humana Press, October 2004
细胞培养技术主要参考资料
离心机
橱柜
实验台
冰箱
培养箱
试剂柜
实验仪器台
超净工作台
实验台
实验台
实验台
实验台
水池
冰箱
衣柜
实验台
显微镜
递物窗
缓冲间
无菌操作室
准备室
细胞培养前的实验准备
下风口
上风口
无菌操作室
超净工作台和CO2培养箱
超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒,使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面,使工作台内构成无菌环境。
CO2培养箱设定的条件为37 ℃,5%CO2
使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题:
①用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证通气。
②保持培养箱内空气干净。定期消毒
③箱内蒸馏水槽中预留灭菌蒸馏水,以保持箱内湿度,避免培养液蒸发。
解剖显微镜
倒置显微镜
血清(天然成分):
基础培养基(人工合成):干粉培养基DMEM 、α-MEM、RPMI1640
水:高纯度的去离子水
(培养基)
抗菌素:通常是青霉素和链霉素联合使用,使用浓度为100U/ml
血清质量好坏是实验成败的关键。
常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、马血清等,其中以胎牛血清质量最好。
优质血清的标准:透明,淡黄色,无沉淀物,无细菌、支原体病毒污染。
血清的灭活(消除补体活性):56 ℃,30 分钟
血清的消毒:过滤除菌
血清的使用浓度为5%~20%
消化液:%胰蛋白酶,使细胞脱离组织或容器壁,
用含血清培养液中止其活性
一般玻璃器皿的清洗分为四个步骤:
1、自来水浸泡
2、洗涤剂刷洗(如有必要进行超声处理)
3、泡酸(浓硫酸、***钾及蒸馏水)
4、流水冲洗过夜,依次用蒸馏水、三蒸水漂洗,最后烘干备用
常用消毒方法:
1、湿热灭菌法(高压蒸汽灭菌),15磅,15~20min
2、过滤除菌(如:血清的除菌)
细胞培养(cell culture)是指细胞的离体培养,是在无菌条件下,把动物或植物的细胞从机体中分离出来,置于培养皿中,并在一个合适的环境中,给以营养物质,使之继续生存和繁殖的方法。
细胞培养
(Cell Culture)
细胞培养的基本概念
原代培养(primary culture),或称为初代培养,就是从供体取下组织细胞后在体外进行的首次培养,中途不分割培养物。常用的原代培养方法有组织块培养法和消化培养法。
原代培养
(Primary Culture)
细胞培养的基本概念