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第二章HIV抗体检测
范围
本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略,适用于各级各种医疗机
构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS病人的诊断、报告和办理的实验室依照。
规范性引用文件
Revisedversion2001.
实验室生物安全通用要求(
GB19489-2004)。
3HIV抗体检测实验室
应吻合《全国艾滋病检测工作规范(1997年版)》中对检测实验室人员、建筑设施和设施等
条件的要求。
应吻合《实验室生物安全通用要求》(GB19489-2004)对II级生物安全实验室(BSL-2)
的各项要求。
实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。
实验室安全防范按本规范第七章规定执行。
4HIV
抗体检测的目的和重点
抗体检测的目的
HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。
以监测为目的的检测是为认识不一样人群
HIV感染率及其变化趋向而进行的检测,检测的
人群包含各种高危人群和一般人群。
以诊断为目的的检测是为了确立个体
HIV感染状况而进行的检测,包含临床检测和自觉
咨询检测、术前检测、依据特别需要进行的体检等。
以血液筛查为目的的检测是为了防范输血流传
HIV而进行的检测,包含献血员筛查和原
料血浆筛查。
抗体检测的重点
筛查试验阳性不可以出阳性报告。
严格遵守实验室标准操作程序(
SOP)。
严格依照试剂盒说明书操作。
注意防范样品间交织污染。
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全国艾滋病检测技术规范
老例HIV抗体检测的方法和程序
HIV抗体检测分为筛查试验(包含初筛和复检)和确认试验。
一定是经国家食品药品督查管理局注册同意、批批检合格、在有效期内的试剂。介绍使用经
临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。
(ELISA)
目前国内外主要使用第三代(双抗原夹心法)试剂,少量使用第二代试剂。血源筛查仍以第
三代ELISA为主,国际上有些国家和地区已将线性免疫酶测定(第四代ELISA试剂)用于血源筛
查。第四代ELISA试剂是近来发展起来的HIV抗原抗体结合测定试剂,可同时检测P24抗原和抗
HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂对比,检出时间提前了4~。其长处在于能同时检测
抗原抗体,降低血源筛查的节余危险度。
(RT)及其他检测
跟着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展,及对无症状HIV感染者供给自觉
咨询检测(VCT)的迫切需求,简略、迅速的HIV检测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种:
(1)明胶颗粒凝集试验(PA):PA是HIV血清抗体检测的一种简略方法,是将HIV抗原致敏
明胶颗粒作为载体,与待检样品作用,混匀后保温(一般为室温)。当待检样品含有HIV抗体时,
经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反响,依据明胶颗粒在孔中的凝集状况判读结果。
PA试剂有两种,HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂(AFDHIV-1/2PA),已经我国食品药品
督查管理局(SFDA)注册同意;HIV-1、HIV-2抗原分奇特敏的PA试剂(SERODIA-HIV-1/2)可初
步区分HIV-1型和HIV-2型,目前我国还没有引进。
(2)斑点EIA或称斑点ELISA(dot-EIA):以***纤维膜为载体,将HIV抗原滴在膜上成点
状,即为固相抗原。加血清样品作用,今后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色
斑点。反响时间在10min之内,使用抗原量少。
(3)斑点免疫胶体金(或胶体硒)迅速试验:与斑点EIA相似,也是以***纤维膜为载体。
差别在于不用酶标志抗体,而代之以红色的胶体金(或胶体硒)A蛋白,用渗滤法作为清洗方法。
试剂稳固,可室温长远保存。试验时不需任何设施,迅速、简略、特异性较好,敏感性约相当于
中度敏感的ELISA,适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目前已有在国内被SFDA同意注册的国
外进口试剂和国内产品。一般可在1030min内判读结果。
(4)艾滋病唾液检测卡:在***纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原,可同时
检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体,原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的HIVIgA与IgG
抗体,敏感性特异性与ELISA周边,可防范静脉穿刺。但样品预办理时间长且售价较高。以唾液
为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法(WB)试剂已经美国FDA同意。
(5)其他迅速筛查试验方法:家庭HIV检测(HomeAccessSystem)等。
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全国艾滋病检测技术规范
1996年美国FDA初次同意HIV-1尿液ELISA试剂,我国也正在研制尿液HIV抗体检测试剂。
主要适用于静脉注射毒品(IDUs)人群和其他高危人群的大面积流行病学检查、监测。筛查阳性者仍需采血做确认试验才能确立。
依据检测目的采纳吻合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测(复检)。
:以第三代ELISA(双抗原夹心法)为例。
(1)实验准备:试验开始前将试剂和样品搁置在室温(1823℃),按实验室SOP做好试剂准
备。
磷酸盐缓冲液:若液体内有结晶,应搁置在37℃直至溶解,用蒸馏水1:25稀释浓缩液,4℃保存2周。
TMB底物液:使用前配制,TMB液和过氧化脲液等量混匀。
1M硫酸停止液:85ml蒸馏水中加入5ml浓硫酸。
备好试剂盒、待检样品和外面比较质控血清后,按试剂盒说明书以及质控和安全防范要求进行筛查检测。
(2)实验操作
①装好所需使用数量的孔条,每孔均加入100μl样品稀释液。设3个阴性比较孔,1个HIV-1
阳性比较孔,若需要可再设1个HIV-2阳性比较孔。
②每孔加入50μl待检样品及比较(比较要后加),未用孔用样品稀释液加满以溶解结合物
球,省得拥堵洗板机孔。可震摇15S,37±2℃孵育60±5min。
③置洗板机上清洗6遍(用洗液将反响孔完整加满,静置3060S,共清洗6遍,洗完后孔上方及底部不该残余液体,严禁在滤纸上拍干)。
④每孔加入100μl底物液,勿搅动,室温避光孵育30±2min。
⑤每孔加入100μl1M硫酸停止反响,充分混匀。
⑥在2h内置于酶标仪读数,单波长450nm,或双波长450/630nm测OD值。
(3)实验结果
①阴性比较(NC),HIV-1阳性比较(PC1),HIV-2阳性比较(PC2)NC一定<,消除NC≥,计算NC均匀值。NC界限范围:<NC<。
②吻合以下条件的实验成立:
两个以上的NC可用。
PC1-NC均值≥,PC2-NC均值≥
③Cutoff值=阴性比较均值+
小于Cutoff为阴性,大于或等于Cutoff为阳性
(4)报告:对呈阴性反响的样品,可由实行检测的实验室出具HIV抗体阴性报告;对呈阳
性反响的样品,须进行复检,不可以出阳性报告。
:对初筛呈阳性反响的样品用原有试剂和别的一种不一样原理或不一样厂家的筛
查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反响,则报告HIV抗体阴性;如均呈阳性反响,或一
阴一阳,需送艾滋病确认实验室进行确认(见图1)。
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全国艾滋病检测技术规范
样品
筛查试剂
初筛检测
阳性反响阴性反响
原有试剂加别的一种筛查试剂
重复检测
均阳性反响一阴一阳均阴性反响
送确认实验室确认
报告阴性
图1HIV抗体筛查检测流程
初筛试验结果的报告
对HIV抗体筛查试验,呈阴性反响者可出具“
HIV抗体阴性”报告(可用附表
1);对初筛试
验呈阳性反响者不可以出阳性报告,可出具“
HIV抗体待复查”报告(附表
1)。
初筛试验呈阳性反响样品的转送
如需奉上司实验室进行复测或确认,需要填写“
HIV抗体复测送检单”(附表2),经1名检
验人员和1名拥有中级以上技术职称的人员审查签字。送当地艾滋病筛查中心实验室,再转送艾滋病确认实验室,或在本实验室复检后直接送确认实验室。
,均需做好检测后咨询。
一定是经国家食品药品督查管理局注册同意、在有效期内的试剂。
包含免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEKHIVⅢ)、放射免疫积淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。国内常用的确认试验方法是WB。
有HIV-1/2混杂型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混杂型试剂进行检测,假如呈
阴性反响,则报告HIV抗体阴性;假如呈阳性反响,则报告HIV-1抗体阳性;假如不满足阳性标
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全国艾滋病检测技术规范
准,则判为HIV抗体检测结果不确立。假如出现HIV-2型的特异性指示条带,需用HIV-2型免疫
印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验,呈阴性反响,报告HIV-2抗体阴性;呈阳性反响则报告HIV-2
抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列解析,见图2。
筛查试验阳性反响样品
免疫印迹法(WB,HIV-1/2混杂型)
出现HIV-2指示条带
阴性反响HIV-1阳性反响不确立反响
免疫印迹法(WB,HIV-2)
报告阴性报告HIV-1阳性
阳性反响阴性反响
报告HIV-2血清学阳性
不确立反响
报告阴性
每3个月随访1次,共2次,仍属可疑,则报告阴性;如随访时期HIV抗体出现阳性反
应则报告阳性。随访时期可依据需要,检测病毒核酸和或P24抗原,作为辅助诊断。
图2HIV抗体确认检测流程
下边是我国使用WB确认HIV感染的判断标准和判断结果的基根源则。在实质工作中还应参
照所用试剂盒说明书综合判断,遇疑难状况应报上司实验室解决。
-1抗体阳性(+)
最少有2条env带(gp41和gp160/gp120)出现,或最少1条env带和p24带同时出现。
-2抗体血清学阳性(+)
同时吻合以下2条标准可判为HIV-2抗体血清学阳性:
(1)吻合WHO阳性判断标准,即出现最少2条env带(gp36和gp140/gp105)。
(2)吻合试剂盒供给的阳性判断标准。
(-)
无HIV抗体特异带出现。
(±)
出现HIV抗体特异带,但不足以判断阳性。
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全国艾滋病检测技术规范
注:①HIV-1抗体特异带包含:env带:gp160/gp120、gp41;gag带:p55、p24、p17(或p18);pol带:p66
(或p65)、p51、p31。②HIV-2抗体特异条带包含:env带:gp140/gp105、gp36;gag带:p56、p26、p16;pol
带:p68、p53、p34。(因为使用的毒株不一样,HIV-2env带也可为gp125/gp80、gp36)。
抗体确认试验结果报告
确认试验由确认实验室依据检测结果出具“
HIV抗体确认检测报告单”(附表3),报告HIV
抗体阳性(+)、HIV抗体阴性(-)及HIV抗体不确立(±)。
吻合HIV-1抗体阳性判断标准,报告“
HIV-1抗体阳性(+)”,并按规定做好检测后咨
询、保密和疫情报告工作。
吻合HIV抗体阴性判断标准,报告“
HIV抗体阴性(-)”。假如近期有高危行为,如性
乱、注射毒品等,或有急性流感样症状等状况,为消除因“窗口期”而出现的假阴性结果,建议
高危行为后
3个月时再做抗体检测。也可进行
HIV-1P24抗原或HIV核酸检测,作为辅助诊断。
吻合HIV抗体不确立判断标准,报告“
HIV抗体不确立(±)”,在备注中应注明“3个
月后复检”,同时进行以下办理:
(1)随访复检:每3个月随访复检1次,连续2次,共6个月。假如检测时裸露时间已超出
3个月,则在3个月后随访1次即可。将前后
2份样品同时检测,仍呈不确立或阴性则报告
HIV
抗体阴性,假如在随访时期发生带型进展,吻合
HIV抗体阳性判断标准则报告
HIV-1或HIV-2
抗
体阳性。
必需时可做HIV-1P24抗原或HIV核酸测定,但检测结果只好作为辅助诊断依照,确认报告要依照血清学随访结果。
。
,按原送检程序反响。如
确认对象户口不属于本辖区,确认报告应同时抄送HIV感染者户口所在地的省艾滋病确认中心实
验室。其他系统确认的地方人员(包含当地和外处),也应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确认中心实验室报告。
,送国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对
象的样品在不一样实验室获取不一致的确认结果时,由国家艾滋病参比实验室和艾滋病确认实验室
审评及技术指导专家组予以仲裁。
6HIV抗体检测的代替策略
除上述老例检测程序之外,可以依据不一样的目的,对HIV流行强度不一样的地区和不一样人群采
用不一样的代替策略,见表1。
表1HIV抗体检测的代替策略
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全国艾滋病检测技术规范
目的
地区
人群
代替策略
艾滋病疫情报告
任何地区
任何人群
代替策略Ⅰ
高流行地区
高危人群
代替策略Ⅱ
VCT
高流行地区
一般人群
代替策略Ⅲ
其他地区
任何人群
代替策略Ⅲ
Ⅰ(HIV感染疫情报告检测策略)
全国HIV感染疫情报告。
,出现阴性反响则报告“HIV抗体阴性(-)”。出现阳性反响则
用两种不一样原理或不一样厂家的试剂复测(此中包含进口第三代ELISA试剂)。
,且此中第三代ELISA试剂复测样品OD值与临界值(Cutoff)
的比值(S/CO)≥,上报疫情(附表4)。两种试剂复测结果均为阳性,但第
三代ELISA试剂复测S/,或两种试剂复测结果呈一阴一阳,应进一步作
确认试验,依照确认试验的标准判断结果(图3)。
送检样品
阳性反响采纳筛查试剂阴性反响
用两种不一样原理或不一样厂家的试剂复测(此中包含进口第三代ELISA试剂)
两种均阳性两种均阴性
进口第三代ELISA
试剂复
进口第三代ELISA
试剂复测
测S/CO比值≥
S/~
一阴一阳
确认试验
阳性阴性
判断阳性,上报疫情不确立,随访判断阴性
图3代替策略Ⅰ(HIV感染疫情报告检测策略)检测流程
Ⅱ(高危人群VCT检测策略)
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全国艾滋病检测技术规范
HIV感染高流行地区高危人群的VCT。应在确认中心实验室和确认实验室或以上实验室指定
的筛查实验室进行,用高质量筛查试剂检测及判断结果()。使用该策略判断结果,阳性
报告须由确认中心实验室和确认实验室或以上实验室认同的筛查实验室出具。
检测程序及结果报告
先用第一种筛查试剂(ELISA-1)检测,出现阴性反响报告
HIV抗体阴性;出现阳性反
应则报告“HIV抗体待复查”,并用第一种酶联试剂(ELISA-1)和第二种酶联试剂(ELISA-2)复检。
两种ELISA试剂检测结果均阴性则报告
HIV抗体阴性;两种
ELISA试剂检测结果均阳
性,且S/,用第三种筛查试剂(高特异性筛查试剂)检测,假如第
三种试剂检测结果为阳性,在吻合使用该策略条件的地区和人群中可以出具“HIV-1抗体阳性(+)”
报告,使用“HIV抗体代替策略检测报告单”(附表5)。
,依照确认试验的结果出报告:两种ELISA试剂检测结果一
阴一阳、两种ELISA试剂检测结果均阳性但一种或二种S/~、第三种筛查试剂
检测结果为可疑或阴性。
样品
阳性ELISA-1阴性
ELISA-1+ELISA-2
两种均阳性一阴一阳两种均阴性
二种S/CO均≥6一种或二种S/CO1~
高特异性筛查试剂
阳性阴性或可疑确认试验
阳性不确立阴性
供给阳性咨询供给咨询供给阴性咨询
出具“HIV抗体阳性”报告随访出具“HIV抗体阴性”报告
图4
代替策略Ⅱ(高危人群
VCT检测策略)检测流程
在发放检测报告的同时上报疫情。
做好检测后咨询。
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全国艾滋病检测技术规范
代替策略Ⅲ(一般人群
VCT检测策略,图5)
适用范围
HIV高流行地区一般人群检测及其他地区各种人群的
VCT检测。
检测程序及结果报告
,出现阴性反响报告
HIV抗体阴性;出现阳性则用第
二种筛查试剂(高特异性)复检。
(另一种高特异性试剂)检测;第二种
筛查试剂检测为阳性则按疑似阳性咨询,建议进一步做确认试验,按确认试验的结果报告。
;第三种试剂检测为阳性按疑似阳性
咨询,建议进一步做确认试验,按确认试验的结果报告。
样品
阳性
筛查试剂
1(高敏感性)
阴性
阳性
筛查试剂
2(高特异性)
阴性
筛查试剂
3(高特异性)
阳性
阴性
供给疑似阳性咨询
建议进一步做确认试验
阳性不确立阴性
供给阳性咨询供给咨询供给阴性咨询
出具“HIV抗体阳性”报告随访出具“HIV抗体阴性”报告
图5代替策略Ⅲ(一般人群VCT策略)的检测及结果报告流程图
。
。
7
HIV抗体检测状况季报的时间和程序(图
6)
艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点应于每季度首月
5日前填写“HIV抗体检测数季报表”(附
表6),向艾滋病筛查中心实验室报告上季度检测状况。
没有艾滋病筛查中心实验室的地区可直接
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全国艾滋病检测技术规范
向艾滋病确认中心实验室报告。
报告的检测状况(附表6)汇总,报告艾滋病确认中心实验室。
(附表6),报告当地艾
滋病确认中心实验室和同级卫生行政部门。
、整理和解析辖区内HIV抗体检测状况,于每季首月15
日前向省级卫生行政部门和中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心(简称中国疾控中心
性艾中心)参比实验室报告。同时,按艾滋病疫情报告的有关规定上报疫情。
(如专项检查与研究等)发现的艾滋病病毒抗体阳性者,应向所在地的省
疾病预防控制中心报告,并填写“HIV抗体确认检测报告单”(附表3),报中国疾控中心性艾中心参比实验室。
,应随时报同级监测人员,以便及时随访检查。
艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点
未设置
每季首月
5日前报告上季检测状况
艾滋病
筛查中
艾滋病筛查中心实验室
心实验
室的地
区
每季首月5日前
每季首月
10日前
报告上季检测状况
报告上季检测状况
艾滋病确认中心实验室
艾滋病确认
每季首月
10
实验室
每季首月15日前
日前报告上
报告上季检测状况
季检测状况
中国CDC性艾中心
省卫生行政部门
同级卫生行政部门
艾滋病参比实验室
图6HIV抗体检测状况季报流程
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