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徐文联等:水稻白叶枯病菌无毒基因的研究初报
水稻白叶
\/一,//.
一/, 。\\ 南京农业学植保系南京硷\/、/
\
\ 摘要
报道用基因标签法克隆水稻白叶枯病菌无毒基因的研究过程。通过接合实验,将
引入水稻白叶枯病菌日表系统号小种中去,在西平板上筛选了个接合、
子;用剪叶接种法,将接合子接种水稻品种//,得到个无毒基因突变体,分别用
粘粒载体和质粒载体构建核基因文库和无毒基因探针,采用菌落
原住杂交法在基因库中钓取了个无毒基因克隆。该无毒基因片断在此病原的不同小
种
关键词:坐塑皂整垂鱼,⋯接合实验,垄圭墨里鼬毫弛粘粒塑墨旦文库粕’屯,
一
、引言
由植物病原细菌黄单胞菌..引起的水稻白叶
枯病,是世界范围内的水稻主要病害之一,尤其在亚洲、太平洋地区更为严重,
每年造成的产量损失平均约在左右,严重的可达至颗粒无收因此,许多国
家对该病的发生、流行和控制都十分重视,并开展了广泛而深入地研究,
,,。但过去的研究中,多着重于该病害的特征、病原物的分类、病原致病性生化
因子、寄主品种的抗病性以及它的发生、发展和流行规律等方面,虽然取得了很大进展,但未能
实现对该病害的根本防治。传统的抗病育种也未取得明显的效果。因此,寻找晟佳的防治途径及
育种方案是目前急需研究的课题。晟近年,分子生物学技术及其在植物病理学中的应用,给植
物病害研究引入了新的思路和实验手段。周期短、可操作性强的植物抗病基因工程也日益受到重
视,并显示出很大的潜力。但是,植物抗病基因工程的发展,很大程度上依赖于植物一病原物相互
作用的分子基础以及植物抗病分子生物学的研究进展。因此,加强对病原致病基因、植物抗病基
因以及二者相互作用分子机理的研究十分重要。
植物抗病反应的类型有非寄主抗性和小种专化性抗性等。根据对基因的假说,
,在小种专化性的病害中,植物的抗病性只有在病原的无毒基因和寄主的抗病基因同时显性
作用时才能表现。因此,研究病原的无毒基因,将有助于鉴定和克隆寄主的抗病基因。
水稻白叶枯病是小种专化性病害。因此,能够进行无毒基因方面的研究本研究
用基因标签法克隆并分析了水稻白叶枯病菌日本系统号小种对应于寄主抗病基因的无毒
基因,并鉴定了它在不同小种中的同源性,为水稻抗叶枯病基因工程的研究提供了材料。
二、材料和方法
.菌株、质粒、培养基和抗生素
①计划资助项目
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高技术通讯.
研究中使用的菌株、质粒见表。培养大肠杆菌、和质粒扩增使用常规的培
养基...的液体培养使用培养基,固体培养使用培养基.
,用于体外包装物提取的、在培养基每含:,
,,.. .上培养,体外包装物效价的指示菌
在含. 麦芽糖的培养上培养,使用的抗生素有卡那毒素、壮观霉素、利福霉素
和氨苄青霉素,它们的使用浓度分别为/、/、/、/
、/ 和/。
表研究中使用的菌株和质粒
菌株或质粒相关性状来源
质粒
. . , .
/:: 本研究
, 南京大学生化系
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㈣.
日本小种本研究
日