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一
第卷第期农业生物技术学报年月
. . .
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‘
水稻白叶枯病菌户基因的克隆、同源性和功能分析
/
. 笪里堡::
南京农业大学植保系,南京
.
/ 摘要:以经转座子诱变的水稻白叶枯病菌基因突变体为材料,构建了
基因探针质粒。采用分子杂交法,从基因文库克隆中筛选出个嘶基因克隆
,,其中.,.两个片
段与撵针质粒中侧翼的基因序列同源。以为探针与日本系统、中国系

隆进行同源性分析,结果表明,除与和基因组有同源性
外,与其它所有试验菌株均无同源杂交带出现。功能互补分析表明,能恢复基因
病原细菌的基因是专门控制病菌对寄主植物侵袭力的一类致病基因【。水稻白叶
枯病是亚洲、太平洋地区水稻上主要的病害之一,是由黄单胞杆菌
.,简称引起的前在病菌与致病相关的生理生化性状等方面进行了广
泛的研究,随着重组技术在中的应用,克隆相关基因的遗传体系已逐步建立,至
今已克隆到两个基因“和两个无毒基因【。本研究室已报道用转座子诱变日本
系统号小种,,获得了基因突变体,它们失去了对水稻的致病能力。本研究
以基因突变体为材料,构建了基因探针,筛选出基因克隆,进行功能互补分析,
比较基因在不同小种和不同病原细菌中的同源性。
材料与方法
材料供试菌株及其特征来源列表
培养条件及抗生索所有菌株均在培养基中℃培养,大肠杆菌在培
养基中℃培养氨苄青霉索: · ~,硫酸卡那霉索· ,
壮观霉索· ~ ,利福平· ~ 。
重组技术质粒、粘粒和染色体总提取、电泳、酶切,转化等基本操作均
按方法进行
基因探针的构建分别将质粒和基因突变体基因
组用完全酶切,连接、转化到. 细胞中,在平板上
筛选重组质粒克隆
收稿日期:——
‘。
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农业生物技术学报
衰供试菌株的特征和来源
如
分子杂交技术参见文献进行。
功能互补分析参见文献进行。
结果与分析
. 基因探针的构建
将超离心提纯的质粒和Ⅱ基因突变体的染色体
用完全酶切、连接、,转化频率为.~ 。在
—平板上筛选重组子将白色菌落挑到平板上,选取双抗
性,的克隆,获得了Ⅱ基因探针质粒,大小约为.,其中
。中抗性由载体质粒上的基因编
码,抗性由基因突变体中上的基因编码,有趣的是,基
因的表达水平在基因突变体和大肠杆菌中存在差异中的抗性水
平仅为~ · 。,但其将其及其旁侧序列与重组,转化到大肠杆菌之
后, 抗性水平可提高到· ~。这可能与来源于大肠杆菌有关,也可能
是由这两种菌的遗传背景不同所致
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第期饶军华等: 水稻白叶枯病苗基因的克隆、同源性和功姥分析
. 基因的克隆
以经一标记的为探针,与Ⅲ基因文库脚克隆进行原位杂交和点
杂交结果表明,在个Ⅲ基因文库克隆中有个阳性克隆,其外源
插入片段为,其中有个限制性位点图。杂交结果发现
中有个片段.,.与探针质粒有同源杂交带图
图的酶切图谱和物理图谱
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