文档介绍：华东师范大学
硕士学位论文
胃癌相关S100P的基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备
姓名:蒋昌龙
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:张红锋;张庆华
20050501
摘要具有显著差异表达的基因属于基因家族,位于染色体基因与肿瘤的发生进展关系密切,其表达在多种恶本研究采用了经典的分子生物学研究路线,即从基因表达蛋白,再制备抗体,从而获得抗母叽慷群透咛匾煨远嗫寺】固澹A俅参赴┘觳馓峁┲匾R据和奠定基础。首先通过—椒ɡ┰鯯基因克隆至原核表达载体徊⑺婧蠼粜钥寺〉既氪蟪Ω司有多聚组氨酸的特点,通过纯化柱进行亲和层析纯化;将纯化的鞍平上是否与胃癌的发生、进展密切相关提供研究基础。稀释的情况下,免疫印迹显示了相当好的效果,证明了鞍椎母叽慷燃岸本实验室应用荧光标记的差异显示技术分析了例临床胃癌组织、癌旁组织之间表达基因的差异,确定了在基因的水平上在胃癌及癌旁组织中处。近年来研究表明,性肿瘤中明显增高,但对于墓δ苋床磺宄基因全长蛄校⒔康中进行诱导表达;利用靥逶谄涠嗫寺∥坏隳┒撕免疫疌小鼠,制备抗鞍椎亩嗫寺】固澹唤ü齏印迹,在验证抗鞍锥嗫寺】固逄匾煨缘耐保纯晌Q橹基因在蛋白水通过印迹实验结果显示,在抗亩嗫寺】固逡詌:克隆抗体的高特异性。这为进一步研究蛟谖钢琢鲋械谋浠榭黾捌在胃肿瘤发生、进展过程中的作用打下了基础。关键词:胃癌,寺。诤系鞍祝吮泶铮缀筒阄觯嗫寺】固
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整旦蕴硕士学位论文答辩委员会成员名单华东师范大学姓名职称单位备注孙心德教授主席王耀发顾福康
娘珈猗学位论文作者签名彳锛胁日期:望:禾学位论文使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在本人完全了解华东师范大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。.有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。文中作了明确说明并表示谢意。导师签名:日期:~
望查堕翌查堂婴主堂竺堡墨———前言居世界上癌症死亡率的第二位,在我国死亡率占恶性肿瘤的第一位,平均死亡率高达/万,男性高于女性,男:女约。发病年龄高峰为岁~岁。,日本、丹麦等国发病率高,在我国以山东、浙江、床症状明显时如出现消瘦、乏力、贫血甚至出现呕血和黑便时胃癌己属晚期。冒癌根据病理分型法,可以分为腺癌、粘液癌、低分化腺癌、未分化癌及其它较少见的胃癌的病因迄今尚未完全阐明,由于胃肿瘤发生是一个多步骤演进过程,其当复杂。目前的研究表明,胃癌的发生、进展与癌基因及抑癌基因突变、微卫星不稳定蛙、基因的***化修饰、细胞粘附因子等异常都有密切联系本实验室通过对对临床胃癌及癌旁标本悦致停猿π臀赴,分别进行基因表达系列分析片以及酒芯糠治隽税┳橹氚┡宰橹杏胁钜毂泶琭的基因。综合以上龇治鼋峁范嗽诨虻膍缴显谖赴┘鞍┡宰橹中差异表达的基因。这些基因不仅涵盖了一些已知的癌基因、抑癌基因与细胞周期调控相关基因、细胞黏附因子及其它细胞因子,而且还包括了一些功能未知的基因及序列。针对其中一个颍琧酒峁允荆晕赴┡员瓯局校有对标本显示蛩接忻飨韵碌飨窒;结果显示:虻谋昵┰谖赴┘鞍┡宰橹屑觳獗壤:硐治O灾碌胃癌是源自胃粘膜上皮细胞的恶性肿瘤,占胃恶性肿瘤的%。胃癌死亡率位上海、福建等沿海地区为高发区⋯。胃癌早期多无症状或仅有轻微症状如上腹不适、轻微腹痛,容易误诊;当临胃癌组织类型与细胞分裂增殖、细胞凋亡、浸润转移以及免疫逃逸等相关基因有关,分子机理相,籄芯片结果:蛟谖赴┘鞍┡宰橹觳獾降挠ü庑藕,琫图一缸橹峁雇十二指肠幽门口
懒”嘣㈣:一韪鈏队√囊枰籐燃囊》』二塑翼:\\菪隔开,并分散在氨基及羧基端。说腅由于其规则性,与岷系那缀比值为一硐治<觳獾较碌飨窒。综合上述实验结果,蛟谄位于染色体处。虮嗦氲牡鞍譙蛋白属于蛋白家族。蛋白存在与多种类型细胞的胞质及/或核内,参与诸如细胞周期进程、分化等多种细处。虿唤鲇隒结合,而且结合“和S醒芯肯允荆琒蛋白在前列腺癌的发病中可能起着重要作用。蛋白是年由⑾植⒚囊蛔樗嵝愿频鹘诘鞍祝艏「频白易濉D壳***⑾郑琒鞍准易灏龅头肿恿康牡鞍祝涮氐闶怯个F渲龌蛟谌旧疾病上皮中表达。目前,家族中已经有个基因完成克隆,┗蛟谌说纳掀ぜ芭嘌慕腔赴斜泶铩薄’。普遍认为,蛋白作为钙结合蛋白,在激活的情况下,调节亚细胞内特定靶力是欢说倍¨。蛋白欢薊结构域是可变的,是每个蛋睠啪№