文档介绍：年第期
兔骨髓间充质干细胞的分离培养
闫颖颖。,张静芳,和小娥,王新庄
.西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌;.河南农业大学牧医工程学院,河南郑州
摘要:为探讨体外分离及培养扩增兔骨髓间充质干细胞的方法,无菌采取兔股骨,用含
的培养液冲骨髓腔,采用全骨髓细胞贴壁培养法对进行纯化扩增,倒置显
微镜下观察原代及传代细胞的形态、生长情况、绘制细胞生长曲线。结果显示,为贴壁生长
细胞,形态均匀呈纤维样,增殖能力强,多次传代仍能保持其生物学特性。采用全骨髓贴壁培养法
能够较好地纯化和扩增。
关键词:骨髓间充质干细胞;体外培养;兔
中图分类号:. 文献标识码: 文章编号:———
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骨髓问充质干细胞是一群来源于骨髓较多的,从而为诱导向心肌细胞分化
组织中的非造血干细胞,属于多能干细胞口,具有向奠定基础。
中胚层组织及神经外胚层组织分化的能力。。因材料和方法
其取材方便,易于分离培养,体外扩增快,且自体骨
. 供试动物
髓干细胞移植不易产生免疫排斥反应等优点在临床新西兰大耳白兔,由河南实验动物中心提供。
应用中备受重视,已经成为组织工程、细胞治疗、基. 主要试剂及仪器
因治疗等方面研究的热点。然而骨髓中的含培养液、胎牛血清杭州四季青生物工
量非常少,每万至万个单核细胞中大约有个程有限公司、胰蛋白酶、倒置显微镜
,如何迅速、大量获取有生长活力的优质的、离心机江苏大地自动化仪器厂。
,是目前研究中亟待解决的问题。. 方法
本试验旨在通过体外培养扩增获得纯度较高且数量.. 的分离培养无菌采取兔股骨,收集
收稿日期:——
基金项目:国家“”高新技术项目;河南农业大学人才引进基金;河南省基础与前沿技术研究计划
作者简介:闵颖颖一,女,河南焦作人,在读硕士研究生,研究方向:动物胚胎工程。
通讯作者:王新庄一,男,陕西渭南人,教授,博士,博士生导师,主要从事哺乳动物胚胎工程研究。
河南农业科学
骨髓腔内的组织细胞,. 滤纱过滤后面,置
于离心管中,/离心,吸去脂
肪及上清。用将沉淀的细胞吹起,重新悬
浮细胞。将细胞悬液用/台酚兰染液染色,
计数个细胞,调整密度,染色后蓝色的死细胞数
小于% 方可继续试验。以培养液含
% 调整细胞数为~×个/接种图培养第天生长情况
于培养瓶中,于。、℃条件下培养。后换. 的传代培养与扩增
液,去除非贴壁细胞,以后每换液次。传代后的细胞很快贴壁,生长旺盛时呈旋涡状,
.. 传代培养细胞融合达%以上时, 平均即可铺满瓶底。传代后,细胞不以集落形
冲洗,. 胰蛋白酶消化,用含胎牛血式生长,而是呈均匀分布的长梭形细胞平均生长,
清的终止消化。反复轻轻吹打细胞,细胞~代后可达到较高的纯度。
悬液以/离心,收集细胞,获得原. 的鉴定结果
代,以:比例传代。采用免疫细胞化学方法进行鉴定,指标
.. 的鉴定选用生长状况良好的第包括、。结果表明:胞浆未着色,细胞核
代,采用法检测细胞表面抗原。被复染成蓝色,为阴性图;胞浆呈淡棕黄