文档介绍：山东医药年第卷第期
双向凝胶电泳技术在胰腺癌蛋白质
组学研究中的应用及条件优化
宗美娟。孟猛。
淄博职业学院,山东淄博;山东省医药生物技术研究中心,卫生部
生物技术药物重点实验室;山东理工大学
摘要:目的将双向凝胶电泳技术用于胰腺癌蛋白质组学研究并对其条件进行优化。方法对胰腺癌组织、
癌旁组织、胰液等标本在组织研磨、裂解、蛋白抽提及双向凝胶电泳等各个环节进行调整和优化。结果液氮研磨
法可得到更多的蛋白质点;超声方法去除组织中核酸效果较好;二硫苏糖醇平衡时间—,碘乙酰胺
从平衡时间应等同或略长于’平衡时间时可得到高质量图谱;丙酮沉淀法可获得较多的胰液生物标志物蛋
白点;将—根长度的胶条在块凝胶上进行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳
的方法使双向电泳的重复性和通量显著提高。结论本研究成功建立了双向凝胶电泳技术平台,所获得
的电泳图谱分辨率高、重复性好,能够较好地用于胰腺癌蛋白质组学研究。
关键词:胰腺肿瘤,胰腺癌;双向凝胶电泳;蛋白质组学
中图分类号:. 文献标志码: 文章编号:
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近年来,双向凝胶电泳技术被广泛应用于细胞、组学研究并对其试验条件进行了优化。现报告如下。
组织、体液中蛋白质组成分析及蛋白质复合物分离材料与方法
等⋯。原理是根据等电点及相对分子质量不同把. 材料①试剂:考马斯亮蓝,胶条缓冲液
复杂的蛋白质混合物在二维平面上分开,得到蛋白,固相胶条,矿物
质组图谱。胰腺位置隐蔽,胰腺癌临床症状不油,.试剂盒,—试剂盒,样品研磨
典型,同时又缺少敏感和特异性的诊断指标,故发现试剂盒,尿素,硫脲,,二
硫苏糖醇,三羟甲基氨基甲烷,碘
新的敏感性、特异性强的标记物进行早期筛查成为当
乙酰胺从,甘氨酸,丙烯酰胺,甲基双丙烯酰胺,
前胰腺癌研究的主要方向。年月~年
月,我们将双向凝胶电泳技术用于胰腺癌蛋白质四甲基乙二胺,过硫酸铵,硝酸银,十二烷
基硫酸钠,甘油等;其余为国产分析纯试剂。
基金项目:山东省重大科技攻关课题资助项目。②设备与器材:精密天平,超声粉碎仪
山东医药年第卷第期
,高速低温离心机,酶标结果
仪,Ⅱ等电聚焦仪、垂液氮研磨法可得到更多的蛋白质点;超声方法
直电泳仪和.,扫去除组织中核酸效果较好;平衡时间一
描仪,纯水蒸馏装置,纯水仪, ,平衡时间应等同于或略长于平衡时
和一脱色摇床,.滤膜,滤器,研钵间时可得到高质量图谱,其他时间组合可因平衡不
与研棒等。充分造成第二向拖尾;丙酮沉淀法可获得较多的胰
. 胰腺癌组织样品预处理①标本收集:手术液生物标志物蛋白点;将~根长度的
切除后内切取边缘无坏死肿瘤组织及相邻胶条在块凝胶上进行—的方法
处癌旁组织约. ×.,用仔细使双向电泳的重复性和通量显著提高。
清洗血迹与杂质,剪除坏死组织等干扰部分。标本讨论
保持冰浴或液氮浴,用前一℃保存。②组织研双向凝胶电泳技术是疾病蛋白质组学研究的重
磨:分别采用及液氮法。后者具要手段之一。分离尽可能多的蛋白质,即提高双向
体步骤为在洁净培