文档介绍：第五章
愈伤组织的诱导
和植株再生
愈伤组织的诱导和植株再生
愈伤组织的诱导
再生途径
愈伤诱导和植株再生的机制
影响愈伤诱导和植株再生的因素
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6. 长期培养物形态发生潜力的丧失:
愈伤组织的诱导(callus induction)
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从理论上讲:是细胞全能性(totipotency)实现的主要途径;
从实践上讲:组织培养的目的,绝大多数情况下是要获得再生植株。而绝大多数离体组织、细胞的形态建成都要先经过脱分化成为愈伤组织才能再生。所以愈伤组织诱导是植物组织培养的关键技术之一。
愈伤组织的诱导
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启动期(诱导期),为细胞分裂做准备,细胞大小不变,合成代谢活跃,RNA含量增加,核体积增大;
分裂期:外层细胞开始分裂,细胞变小,当体积最小,细胞核和核仁最大,细胞内无大液泡,RNA含量最高时,进入高峰。
分化期(形成期):细胞分裂深入到局部内部,形成拟分生组织,最后可以分化成维管组织。
愈伤组织的诱导
:(除外植体外)
激素:一般需要2,4-D,高浓度的其他生长素也可以;有时适当添加细胞分裂素可提高愈伤的质量,利于分化;极少数物种(白芜箐)可用细胞分裂素诱导愈伤;
培养基的盐浓度:一般高盐培养基、还原态氮等;
其他附加物:AgNO3抑制内源乙烯,利于细胞分裂。
愈伤组织的诱导
:愈伤可以在诱导培养基上继代,为使愈伤生长更加健康,也可以适当减少2,4-D的浓度。可以用液体培养基悬浮培养继代。
愈伤组织的诱导
:体细胞无性系变异(somaclonal variation)在愈伤组织培养过程中经常出现。可以有染色体倍性变化、数目变化、结构变异、点突变等。与后生遗传变异(ic variation)不同。无性系变异是愈伤组织失去分化能力的主要原因,可以在育种上作为一种诱变方法加以利用(p159, 第9章p211)。
愈伤组织的诱导
6. 长期培养物形态发生潜力的丧失:
胚性愈伤和非胚性愈伤
遗传说:认为遗传物质的变化,如多倍化、非整倍体、基因突变等;不可逆。
生理说:由内源激素不平衡等生理因素引起,有时可逆。如胡萝卜悬浮培养物加活性炭可恢复胚性。
竞争说:认为非胚性愈伤的生长速度比胚性愈伤快,继代久了,胚性愈伤越来越少,最后丧失分化能力。
愈伤组织的诱导