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或贴壁培养;
,做好标记;
-600×g离心10min。移除上清。
;
;
-20℃1h,然后移至-80℃24-48h;
。
转染的细胞:需要的是对数期的细胞>95%发育能力,可以完成成功的转染。
载氧:对于最优生长条件和蛋白的表达,昆虫细胞要求被动的通氧。积极的通氧系统要求溶
氧饱和在10%-50%
Sf900II和sf900Ⅲ的区别:一般推荐Sf900II来大量表达蛋白
Sf900II含有表面活性剂(剪切力保护剂(保护细胞在转瓶中培养时不会受剪切力到伤害))
当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的计划时,注意无血清培养基不能直接用于螯合树脂,因
为培养基的成分会除去树脂中的镍离子。
细胞培养的一般顺序:复苏——传代——传代稳定——冻存
应当遵循的一般过程:复苏——贴壁培养——悬浮——悬浮扩大培养(产生目标蛋白)
(也可不经过贴壁培养,直接悬浮培养)
贴壁时间:45min
悬浮的转速:80rpm
附:离心机rcf与g的换算:
无血清培养基可以选择性加入一定的抑菌剂防止细菌或者真菌污染:
培养基:GIBCO-SFM900
加青霉素链霉素抑制细菌生长***霉素B抑制真菌生长