文档介绍：应用化学系本科化学实验报告
课程名称综合化学实验成绩评定
实验项目名称设计实验指导教师
实验项目类型综合化学实验实验地点食工楼 6 楼 633 室
班级实验者学号
实验时间2012年4月18日上午~4月18日下午温度 13~26 ℃湿度 65~80 %
2012年4月25日上午~4月25日下午温度 16~23 ℃湿度 65~80 %
一、实验目的
(薄层层析法);
(紫外可见分光光度法);
二、实验原理
1. 类胡萝卜素(carotenoids)是自然界广泛存在的天然色素,包括一类碳氢化合物(Carotenes)及它们的氧化衍生物(Xanthophylls),它们由8个类异戊二烯单位组成。对天然类胡萝卜素进行分离纯化和结构鉴定是十分重要的基础研究工作之一。紫外可见吸收光谱(Uv-Vis)主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁,它是研究分子吸收190~750 nm波长范围内的吸收光谱,它不仅在有机化合物的结构鉴定中发挥重要作用,而且依此原理建立的紫外可见分光光度法是应用最广泛的定量分析方法之一。
2. 实验室常用的薄层色谱,其原理是利用混和物中各组分在不相混溶的两相即流动相(展开剂)和固定相(吸附剂)中吸附和解吸的能力的不同,也可以说在两相中的分配不同,当混合物随流动相(展开剂)流过固定相(吸附剂)时,发生了反复多次的吸附和解吸的过程,从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。
利用萜类化合物的溶解度差异进行分离,含羟基、氧环则溶于醇,不含羟基、氧环(多烯)则溶于石油醚。
三、试剂及器材
1. 原料,试剂
胡萝卜干粉或新鲜胡萝卜;α-和β-胡萝卜素标准品、(95%和无水)乙醇、石油醚(沸程30℃~60℃、60℃~90℃)、***、乙酸乙酯、苯、甲苯、***、***仿、正已烷、环己烷、抗坏血酸、BHT、盐酸、氢氧化钠、硅胶层析板、氧化铝层析板和纯水。
2. 仪器
HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);
BS224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);
UV8000A紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司);
RE52CS旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);
四、操作步骤
1. 1试剂的配制
β-胡萝卜素标准溶液:准确称β- mg于小烧杯中,加入10 mg抗坏血酸+ 10 mg BHT于小烧杯中,再先加入少量***仿溶解后,再用石油醚定容至50ml摇匀,即配成浓度为500 μg/ml β-胡萝卜素标准溶液的使用溶液,转移至棕色试剂瓶中贮存备用。
吸收曲线和标准曲线的测绘
按表1的比例要求移取不同体积的500 μg/mlβ-胡萝卜素使用液,用石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)
ml()的一系列不同浓度的标准溶液。取中间浓度的标准溶液,以含有相同浓度抗坏血酸+BHT的石油醚(沸程要与提取胡萝卜素用的石油醚相同)溶液为参比溶液,用1 cm比色杯,于紫外可见分光光度计在200~800 nm波段进行波长扫描,根据扫描结果从而可绘得β-胡萝卜素的吸收曲线。也可以用同样的方法绘制从胡萝卜中提取得到的胡萝卜的吸收曲线,并比较和分析两吸收曲线的异同。根据测得的吸收曲线可以找到β-胡萝卜素的最大吸