文档介绍：医学检验实验指导
《临床检验基础》
实验指导
(供医学检验专业五年制本科使用)
遵义医学院医学检验系组编
2005年12月
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第一章外周血常规检验综合评价实验
【检验流程】
实验一红细胞计数
【目的】掌握显微镜红细胞计数(red blood cell count)方法。
【原理】用等渗稀释液将血液稀释一定的倍数,充入计数池后,在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量,经换算求出每升血液中的红细胞数量。
【器材】显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒。
【试剂】红细胞稀释液(Hayem液):***,(或无
)蒸馏水加至200ml。溶解后加20g/l伊红溶液1滴,过滤后使用。
【标本】外周血或抗凝血(EDTA抗凝)。
【操作】
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,加红细胞稀释液2ml。
,檫去管外余血,轻轻加至红细胞稀释液底部,再轻吸上清夜清洗吸管2~3次,立即混匀。
,室温下平放3~5min,待细胞下沉后于显微镜下计数。
。
红细胞/L=N325/531031063200=N31010=N/10031012
N : 表示5个方格内数得的红细胞数。
25/5 :将5个大方格内数得的红细胞数换算成1个大方格的红细胞数。 310 :将1个大方格红细胞换算成1ul血液内红细胞。
3106:1L=106ul
200:为血液的稀释倍数。
【注意事项】
,针刺部位深度必须适当。
、准确,采血部位不得有水肿、发绀、冻疮、炎症等。红细胞数量增高时可适当加大稀释倍数。
、数左不数右的原则。避免多数或漏数。
,小试管、计数板均须清洁干燥,以免杂质、微粒等被误认为是细胞。
,也可用新鲜配制的等渗盐水代替。
,不能产生满溢、气泡、或充池不足的现象。
,每个方格之间相差超过20个以上时要重新充池计数。正常数值范围内,2次红细胞计数相差不得超过5%。
【方法学评价】目视计数法是传统的的红细胞计数法,不需要特殊设备,但操作复杂、费时。
【质量控制】
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,多采用两差比值(r)评价。
:①稀释液或血液加样不准确。②吸血时吸管内有气泡。③未檫去吸管外血。④血液加入稀释液时使上清液浑浊,血液被吸管带出。⑤稀释液放置的时间过长,蒸发浓缩。
【参考值】
①成年男性:(~)31012/L。
②成年女性:(~)31012/L。
③新生儿: (~)31012/L。
实验二血红蛋白测定
***花高铁血红蛋白测定法
【目的】掌握***化高铁血红蛋白()测定方法。
【原理】在血红蛋白转化液中,除硫化血红蛋白外,其余血红蛋白均可被高铁***化钾氧化成高铁血红蛋白,-)结合,生成稳定的复合物***化高铁血红蛋白(hemoglobin cyanide,)。棕红色的***化高铁血红蛋白在波长540nm处有吸收峰,可用校正的高精密分光光度计进行直接定量测定,参考液进行比色法测定,根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。
【器材】一次性消毒采血针,微量吸管,试管。5ml移液管,75%(V/V)乙
醇棉球,无菌干棉球,分光光度计,试管。
【试剂】
(文齐液)***化钾(KCN)50mg,高铁***化钾[)6]200mg,无水磷酸二氢钾(KH2PO4)140mg,Triton X –100 ,蒸馏水加至1000ml,~。此液淡黄色透明溶液,用蒸馏水调零,,波长540nm处的吸光度应<。贮存在棕色有塞玻璃瓶中,放4℃冰箱保存,一般可保存数月。如发现试剂变绿、浑浊不能使用。
(200g/L)商品试剂。
【标本】外周血。
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【操作】
(1)加转化液:转化液。
(2)采血与转化:取全血20ul,加到盛有转化液的试管底部,用上清液反复冲洗吸管3次,充分混合,静置5min。
(3)测定:以符合WHO标准的分光光度计(常规测定时带宽应小于6cm)。波长540nm处,光径(比色杯内径