文档介绍：反相高效液相色谱法测定对羟基苯甲酸酯类
对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱测定
一、实验目的
⒈学****高效液相色谱用保留值定性和用归一化法定量的技术。
⒉熟悉高效液相色谱分析操作。
。
二、实验原理
高效液相色谱仪是一种色谱分析仪器,主要用于有机化合物的分析,可以对已知80%左右的有机化合物进行分离和分析。特别适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物以及生物活性物质的分离和分析。液相色谱仪在医药、食品、农业、生命科学、化工和环保等领域都有广泛的应用。
液相色谱分析方法实质上是一种物理化学分析方法,又称色层法或层析法。它是利用不同物质在两相(固定相和流动相)中具有不同的分配系数和吸附能力及其他亲和作用性能的差异为分离依据,当混合物中各组分随流动相移动时,在两相中反复进行多次分配,从而使各组分得到分离。
流动相为液体的色谱分析叫做液相色谱分析。根据分离原理的差异,液相色谱通常分为以下几种类型:液固吸附色谱、液液分配色谱、离子交换色谱和离子对色谱、凝胶色谱。
在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯,它们都是强极性化合物,
可采用反相液相色谱进行分析,选用非极性的C-18烷基键合相作固定相,甲醇的水溶液作流动相。
在一定的色谱条件下,酯类各组分的保留值是恒定的,因而在同样条件下,记录纯酯类各组分和未知样品的色谱图,将测得的未知样品的各组分保留时间与已知纯酯类各组分保留时间对照,便可确定未知样品中各组分存在与否。这种利用纯物质对照定性分析的方法适用于来源已知且组分简单的混合物。
本实验采用归一化法定量。归一化法适用条件及计算公式与气相色谱法相同:
Ci(%)=(fiAi)/(ΣfiAi)
在对羟基苯甲酸酯类混合物属同系物,具有相同的生色团和助色团,因此紫外光度检测器测量时,它们的校正因子相同,故上式便可检测为
Ci(%)=Ai/ΣAi×100%
三、仪器和试剂
仪器:高效液相色谱仪LC-20aT
试剂:对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、甲醇、水(GB/T 6682规定的一级水)、乙酸铵(分析纯)
实验条件
1 色谱柱:长15cm、内径3mm,装填C-18烷基键合相、颗粒度为
10um的固定相。 2 流动相:甲醇+20mmol/L乙酸铵溶液=60+40(体积比)。
3 检测器:紫外光度检测器,检测波长扫描范围 210nm—400nm, 定量波长256nm。
4 进样量:10uL。
四、实验步骤
1、溶液的配制
标准储备液:分别于4个100mL容量瓶中,配制浓度为1000ug/mL的上述4种酯类化合物的甲醇溶液。。
标准工作液:分别取上述4种标准储备液于4个10mL比色管中,配制浓度均为10ug/mL的4 1
种酯类化合物的甲醇溶液,摇匀备用。
取5mL浓度为1000ug/mL的上述4种酯类化合物的甲醇溶液稀释到100mL容量瓶中得浓
度为50ug/mL的4种酯类化合物的甲醇溶液;分别取2mL浓度为50ug/mL的