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优选浙江大学细胞培养基本技术
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是将机体内的某组织取出,分散成单细胞,在人工条件下培养使其生存并不断生长繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、细胞的衰老、死亡等生命现象。
幼稚状态的组织和细胞,如动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养
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意义
原代培养的最大优点是细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,具有二倍体的遗传性,而且大多数细胞表现出原来组织的特性。
利用原代培养做各种实验(药物测试、细胞分化及病毒学方面)效果很好。
原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过的阶段。
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掌握无菌操作技术
了解小鼠解剖操作技术
了解原代细胞培养的一般方法与步骤
了解培养细胞的消化分散
了解倒置显微镜的使用
原代细胞培养的实验目的和要求
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实验材料
实验动物:孕鼠或新生小鼠
液体:细胞生长液(内含20%小牛血清)
%胰蛋白酶
平衡盐溶液
70%乙醇
器材:灭菌镊子、剪刀、灭菌培养皿、细胞培养
瓶、小瓶、烧杯、吸管、酒精灯
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原代细胞培养方法
胰酶消化法
组织块直接培养法
冷消化
温消化
一次性消化
分次消化
消化法:采用无菌操作的方法,把组织(或器官)从动物体内取出,经酶消化处理,使分散成单个细胞,然后在人工条件下培养,使其不断地生长和繁殖。
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贴块法
消化法
原代培养方法分类
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分次消化
消化法的分类
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外植块培养步骤图解
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