文档介绍：实验三酵母核糖核酸的提取及测定
一、研究背景
生物大分子物质通常是指动物植物微生物进行新陈代谢时所产生的蛋白质和核酸等有机化合物。它不仅是生物科学工作者研究者的重要对象,且与化学、医学和食品等工业部门有密切关系。在科研和医学方面,探讨结构与功能、防治某些疾病时常需要较纯的生物大分子物质。然而这类物质往往与自然界存在的各种不同的化合物结合在一起或自身之间相互结合在一起,离体后稳定性较差,含量偏低,且提取的材料复杂,因此纯化的方法也很多。微生物是工业上大量生产核酸的原料,其中酵母最为理想。本次实验以干酵母粉为实验材料,提取RNA,并测定其含量。
二、研究目标
掌握核酸分离纯化的基本设计思想及主要操作细节和生物制品开发的基本思路。
三、研究策略
酵母细胞中RNA通常与蛋白质结合。要提取RNA就要破细胞壁,让它释放出来。浓盐法通过改变细胞膜的通透性释放出胞内物质,然后沸水浴使RNA水解酶失活。再通过调节pH将RNA充分沉淀,洗涤,干燥,测量。
四、研究方案及可行性分析
浓盐法是在加热条件下,利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性,使
RNA释放出来。提取RNA时需注意掌握温度,直接在90~100℃浸提,避免在20~70℃之间的时间过长,磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围,会使RNA因降解而降低提取率。洗涤沉淀时要反复抽提,离心以纯化RNA。
测定提取的核酸含量,只需测定组成核苷酸的任意一种组分即可。碱基在260nm有光吸收,采用紫外吸收法可测定核酸含量。
五、具体实验设计
1、所需主要材料:食品用干酵母粉;
试剂:10%NaCl, 6MHCl , 95%乙醇,2%氨水,RNA沉淀剂(+193ml水+7ml70%过氯酸);
仪器设备:烘箱,离心机,天平,紫外分光光度计,移液器,恒温水浴锅,玻璃匀浆器,pH计。
主要器皿:研钵,离心管,容量瓶25ml 50ml;具塞试管;三角瓶;小烧杯。
2、具体操作步骤
3、预期原始数据记录
1)RNA的提取
硫酸纸质量m0 ______; 干燥后硫酸纸与沉淀总质量m1 ______;
转移后剩余制品与硫酸纸总质量m2 _______;
RNA总制品质量= m1 — m0 =_______;
定量样品质量= m1 — m2 =________;
RNA 制品纯度=_______; 产率=________。
2)紫外法测RNA含量
六、质疑及相关思考
1、作为商品开发,我们更多的是应该考虑市场需求的共性还是个性?为什么?相应的,如何完成相关欲开发产