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大白菜细胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记及应用的制作方法
本发明公开了一种与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记及其应用,该与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记是位于大白菜CMS7311育性恢复基因两侧并与其紧密连锁的InDel78标记和恢复系序列SCAR42标记,,将育性恢复基因限定于大白菜A09染色体一个337kb的范围内。这两个分子标记不仅可应用于大白菜CMS7311育性恢复基因的分子标记辅助选择,提高选择效率,加快育种进程;也为进一步的育性恢复基因的图位克隆、揭示细胞质雄性不育及其育性恢复的分子机制奠定基础。
【专利说明】大白菜细胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记及应用
【技术领域】
[0001]本发明属于农业的植物分子标记辅助育种领域,涉及与一种大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记及应用。
【背景技术】
[0002]大白菜((Lour.)Olsson)是十字花科芸薹属白菜种中最重要的蔬菜作物之一,原产中国,是我国乃至世界性大宗蔬菜。早在上世纪90年代,陕西省农业科学院蔬菜花卉研究所就通过种间杂交及回交技术把甘蓝型油菜CMS中转育至大白菜育成CMS7311(张鲁刚,郝东方,结球白菜温度敏感细胞质雄性不育系CMS7311育性转化的研究,植物学报,2001,43(11):1123-1128),进一步研究确认该CMS也含有异常的开放阅读框0RF224,并带有部分温敏特性;并在大白菜找到可恢复CMS育性的恢复系,确定恢复基因为单基因遗传。由于传统的育性表型选择要等到开花,通过田间直接观察完成。对于携带恢复基因的优良材料,要将其转育为不育系,必须经过杂交,自交,同时用不育系测交判断其基因型等过程,操作起来费时费力,周期长,育种进程慢。为了加快大白菜胞质雄性不育育种速度,采用现代生物技术,进行分子标记辅助育种十分迫切。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于,提供一种大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记,其中:
[0004](I)提供大白菜CMS7311育性恢复基因的InDel标记和SCAR标记各I个;
[0005](2)提供InDel标记和SCAR标记的PCR引物序列;
[0006](3)提供对大白菜细胞质雄性不育及其育性恢复基因进行辅助选择过程中对上述标记进行应用的方法。
[0007]为了实现上述任务,本发明采取如下的技术解决方案:
[0008]一种与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记,其特征在于,所述的与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记是与位于大白菜CMS7311育性恢复基因两侧并与其紧密连锁的InDel78标记和恢复系序列SCAR42标记,其中,InDel78标记由恢复系序列InDel78F和不育系序列InDel78S组成;
[0009]所述的恢复系序列InDel78F大小为1146bp,具体序列如下:
[0010]5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTCCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTACCTTTCTTCTCTTCTTGGTATACGGTCCAATAACAGTATTTAAGATTTTATTTCTATGTCTTTCTTTCTCTCTAGATGCAACTTACTGCCTCTGCAAAGATGGGACAGAAGACAACGCACTTCAAGCATCAATAGACTATGTTTGTGGAAAATTAGATTGCAACCCAATCCTTGACAAGGGTGCTTGTTATCAACCAAACACCATCAAAAGCCACTGTGATTGGGCTGTTAACAGCTACTTCCAGAATGTAGCTCAAGCCCCTGGAAGCTGCGACTTCTCTGGAACTGCCACTACCAGTCAAAACCCACCTSCATGTAAGTAAAAAAGTTTACATTTTGATGCGAAAAGTTGTGGTCTTGATGAGGTTCTTTTGTGCA
GATTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCG
【权利要求】
,其特征在于,所述的与大白菜细胞质雄性不育可育基因紧密连锁的分子标记是与位于大白菜CMS7311育性恢复基因两侧并与其紧密连锁的InDel78标记和恢复系序列SCAR42标记,其中,InDel78标记由恢复系序列InDel78F和不育系序列InDel78S组成;所述的恢复系序列InDel78F大小为1146bp,具体序列如下:
,其特征在于,所述的恢复系序列InDel78F、不育系序列InDel78S和恢复系序列SCAR42标记的PCR特异性扩增引物的序列如下:
ID78F:5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCT-3;
ID78R:5-GTTATAACGAGGCACATAGGTTTC-3;
SC42F1:5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACT-3;
P42R:5-ACTAATGTTTCCGTAGCAATCT-3。
,其特征在于,具体方法是:(1)用CTAB法提取待测材料基因组DNA;
(2)PCR扩增:a、反应体系为25ul体系,各组分物质的含量分别为
:20ng模板DNA;`;;;lpmol/L引物:;ddH20补齐至25ul,混匀,离心;b、PCR扩增程序:预变性94°C/5min,然后94°C/60s,56°C/45s,72°C/lmin,35个循环后,72°C延伸5min;c、电泳:取6ul的PCR扩增产物与2ul的6Xloadingbuffer混匀,%的琼脂糖凝胶中,150V电压下电泳25min,经EB染色后在凝胶成像仪中观察拍照;d、判断:在使用引物ID78F/ID78R扩增出1146bp的目的条带,%;在使用引物SC42F1/P42R扩增出458bp的目的条带,%以上;如果两对引物分别同时扩增出目的条带,则待测材料具有大白菜CMS育性恢复基因的概率为100%。