文档介绍：抗坏血酸的测定方法
抗坏血酸(Vc)的测定方法
测定Vc的国标方法中,荧光法为测定食物中Vc含量的第一标准方法,2、4-二硝基苯肼法作为第二法。
一、荧光法
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二***(OPDA)反应生成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。 g/ml。
GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定
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本实验用水均为蒸馏水,试剂不加说明均为分析纯试剂。
(1)偏磷酸-乙酸液:称取15g偏磷酸,加入40ml冰乙酸及250ml
水,搅拌,放置过夜使之逐渐溶解,加水至500ml。4℃冰箱可保存7~10天。
(2) mol/L硫酸:取10ml硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1200ml。
(3)偏磷酸-乙酸-硫酸液:,。
(4)50% 乙酸钠溶液:称取500g乙酸钠(CH3COONa·3H2O),加水至1000ml。
(5)硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,溶于100ml乙酸钠溶液()中。临用前配制。
(6) 邻苯二***溶液:称取20mg邻苯二***,于临用前用水稀释至100ml。
(7) %百里酚蓝指示剂溶液:,,在玻璃研钵中研磨至溶解,,磨溶后用水稀释至250ml。
变色范围:pH= 红色
pH= 黄色
pH> 兰色
(8) 活性炭的活化:加200g炭粉于1L 1+9盐酸中,加热回流1~2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于110~120℃烘箱中干燥,备用。
(9)标准
抗坏血酸标准溶液(1mg/ml):准确称取50mg抗坏血酸,用溶液()溶于50ml容量瓶中,并稀释至刻度。
抗坏血酸标准使用液(100μg/ml): 取10ml抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml。定容前试pH值,如其pH>,则应用溶液()稀释。
标准曲线的制备:取下述"标准"溶液(抗坏血酸含量10μg/ml)、、,取双份分别置于10ml带盖试管中,。
样品制备
全部实验过程应避光。
称取100g鲜样,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入打碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度。如呈红色,即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释,若呈黄色或兰色,则用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释,。匀浆的取量需根据样品中抗坏血酸的含量而定。当样品液含量在40~100μg/ml之间,一般取20g匀浆,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100ml,过滤,滤液备用。