文档介绍：标准菌种确认标准操作规程
一目的
二范围
本规程适用于质量控制实验室所用标准储备菌株。
三内容
试验菌株
大肠埃希菌(Escherichia coli)[(B)44102]
金黄色葡萄球菌(us aureus)[(B)26003]
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[(B)63501]
白色念珠菌(Candida albicans)[(F)64941]
黑曲霉(Aspergillus niger)[(F)98003]
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[(B)10104]
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[(F)98001]
标准菌株
标准菌株应来自认可的国内或国外菌种收藏机构。
标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后,即为标准储备菌株。
标准储备菌株应进行纯度和特性确认。
工作菌株
标准储备菌株可用于制备每两个月或定期转种的工作菌株。
工作菌株的传代次数应严格控制,不得超过5 代(从菌种收
藏机构获得的标准菌株为第0代),以防止过度的传代增加表型变化的风险。因此必要时,应对工作菌株的纯度和特性进行确认。
菌种确认试验的主要内容
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菌种的纯度确认
纯度检测:是指通过适当的方法检测菌种是否为纯培养物。
试验内容
①菌落形态:在特定的培养基上,将待检测培养物稀释涂布或平板划线,适宜培养后,同一平板上的单菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等是否相似;对于两种或以上形态的出发菌株,应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养,检测是否重复出现相同特征。
②镜检特征:对数生长期的培养物革兰氏染色反应应呈现一致性;细胞形状、大小、荚膜、芽孢等特征应相似。
菌种的特性确认
生化试验:各种微生物具有各自的独特的酶系统,因而在代谢过程中所参与的物质分解和合成代谢的产物也不同,这些代谢产物又具有不同的生化特征。根据此特征,利用生物化学方法来鉴定不同的微生物的试验即为微生物的生化试验。
菌种的确定方法
用无菌接种环粘取培养物,在相应的培养基平板上划线分离单个菌落,并在适宜条件下培养。培养后观察是否具有典型的菌落形态,然后挑取单一纯菌落,进行革兰氏染色、镜检,观察其染色特性及菌形。再做生化试
验或使用菌种鉴定系统进一步鉴定菌种。
大肠埃希菌的确认
菌落形态
取大肠埃希菌新鲜培养物至营养肉汤培养基中,经35℃培养18~24h后,形成菌膜,管底有粘液状沉淀,培养物有粪臭味。
取上述培养物接种于曙红亚甲蓝琼脂(EMB)琼脂平板和麦康凯琼脂平板上,35℃培养18~24h后,观察结果。
①曙红亚甲蓝琼脂(EMB)平板上菌落形态呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色,菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心,圆形,稍凸起,边缘整齐,表面光滑、湿润,常有金属光泽。
②麦康凯琼脂平板上菌落形态呈鲜桃红色或微红色,菌落中心呈