文档介绍：氨基酸对凡纳滨对虾N_乙酰_D_氨基葡萄糖苷酶活力的影响
氨基酸对凡纳滨对虾 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响
1, 211谢晓兰,王悦,陈清西
(1. 厦门大学生命科学学院,国家教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室, 福建厦门 361005;2. 泉州师范学院化学系,福建泉州 362000)
摘要:选用甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰***(Gln)、天冬酰***(Asn)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、组氨酸(His)、赖氨酸(Lys)及精氨酸(Arg)等 18 种氨基酸为效应物,研究它们对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶催化 pNP-NAG 水解反应的影响。结果表明,非极性氨基酸及不带电荷的极性氨基酸对 NAGase 没有明显的抑制作用;带正电荷的碱性氨基酸 L-His 及 Lys 有轻微的激活作用,而 Arg 则先激活后抑制;带负电荷的酸性氨基酸 Asp 及 Glu 有明显的抑制作用,其 IC50 分别为 20,28 mmol/L。研究 Asp,Glu 对酶催化 pNP-NAG 水解反应的抑制作用机理,并测定其抑制常数。研究表明 Asp 及 Glu 的抑制作用均表现为可逆效应,抑制类型均为竞争性抑制,其抑制常数 KI 值分别为 mmol/L 和 mmol/L。关键词:凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei);N-乙酰-
β-D-氨基葡萄糖苷酶;氨基酸;
抑制作用机理中图分类号:Q
文献标识码:A
文章编号:1000–3096(2006)03–0046–05
几丁质酶系是由内切几丁质酶、外切几丁质酶和 N- 乙酰-β-D
-
氨基葡萄糖苷酶
1材料与方法
材料
力影响,对于 NAGase 催化机理的了解、不同生长期的食物调配具有重要的指导作用。
(
[1]
NAGase , )等 3 种不同组分组成
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶从凡纳滨对虾内脏分离纯化得到[9],酶制剂为 PAGE 单一纯,比活力为 1560 U/mg;对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNp-β-D-Ac)购置于上海医药工业研究院生化室;其余试剂均为国产分析纯;使用的蒸馏水为玻璃重蒸水。
的,广泛存在于动物和微生物界。对虾 NAGase 不仅与对虾生长发育过程中的周期性蜕皮及虾幼体的孵化密切相关[2],还与食物消化吸收、抗菌防卫等有关。目前,国外有关于美国龙虾、南极磷虾的 NAGase 的研究报导[3~5], 但研究工作还局限于酶的分离纯化、基本性质及组织
分布差别方面。而国内有关于罗氏沼虾、中国明对虾几丁质酶的研究[6~8],但未见甲壳动物 NAGase 的相关研究报导。南美白对虾,学名凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei),是目前世界上三大养殖对虾中单产量最高的虾种,适应能力强,经济价值高, 中国沿海养殖面积逐年增加,但在对虾养殖过程中经常因食物调配不当、养殖环境污染而扰乱了对虾的正常生理活动与物质代谢,使对虾的健康程度下降,容易受到病原体的侵蚀而感染发病导致大量死亡,造成巨大的经济损失。因此,研究氨基酸对 NAGase 的活
收稿日期:2004–09–20;修回日期:2005–06–27 基金项目:福建省青年科技人才创新项目(2004J054); 福建省教育厅科技计划项目(JA04260) 作者简介:谢晓兰(1974–),女,福建泉州人,讲师,在职博士研究生,主要从事海洋生物酶学研究; 陈清西,通迅作者,教授,
博导, E–mail: ******@.
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海洋科学/2006 年/第 30 卷/第 3 期
方法
亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰***(Gln)、天冬酰***(Asn)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、组氨酸(His)、赖氨酸(Lys)及精氨酸(Arg)等 18 种氨基酸为效应物,研究它们对酶活力的影响。结果(表 1)表明,当效应物浓度为 5~15 mmol/L 时,非极性氨基酸 Gly,Ala,Val,Leu,Ile,Pro 及极性氨基酸 Ser,
Thr,Cys,Gln,Asn 对凡纳滨对虾 NAGase 的催化活力没有明显的影响