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实验目的
1、学习斯氏或八木氏离体蛙心灌溉法。
2、认识心肌的生理特征。
3、观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素(Adr)、乙酰胆碱(Ach)等对离体心脏活动的影响。
实验原理
动物的离体心脏,用理化特征近似于其血浆的代体液灌溉时,在必定的时间内,依旧保拥有节律的舒张活动。改变灌溉液的理化特征,这类节律的舒缩活动也随之发生改变,说明内环境理化要素的相对恒定是保持心脏正常节律活动的必需条件。
实验资料与用品
1、资料:蟾蜍、斯氏蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、蛙心夹、蛙板(蜡盘)、常用手术
器材、滴管、废液缸、棉线
2、药品:任氏液、%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、%肾上腺素、%乙酰胆碱
3、仪器:计算机收集系统、张力传感器
实验步骤
1、取一只蟾蜍,用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上,剪开胸前区皮肤,剪去胸骨,
裸露心脏。用眼科镊提起心包膜,再用眼科剪在心脏缩短时将其剪破,使心脏完整裸露出来。
2、鉴别心脏的各个部分,包含心房、心室、静脉窦等,并观察心跳。
3、插蛙心插管,制备离体蛙心。在左主动脉下穿一线结扎,凑近动脉窦,接着在左右主动
脉下方穿一线,并打一松结留作固定插管用。
4、用手提起结扎线,用眼科剪在左边主动脉距分叉
3mm处向心脏剪一斜口,右手将盛有
少许任氏液的蛙心插管由此口插入,
先进入动脉圆锥,而后在心室缩短时,向前略向左推进
蛙心插管,使之经主动脉瓣插入心室腔内
(注意:为了使蛙心插管顺利插入心室,
应使心室
与动脉圆锥成一条直线)。进入心室的标记是跟着心室搏动,
均有血液喷入插管,
插管的液
面跟着心搏而起落。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上,
以防范标本滑脱。在蛙
心插管插入心室后,用吸管及时吸出管内的血液,
更换新鲜任氏液。提起插管,剪断主动脉
左、右边分支,轻轻提起插管和心脏,在静脉窦下方绕一线,
将左右肺静脉及前后腔静脉一
起结扎(切勿伤害静脉窦),在结扎线下方剪去所有涉及的组织,将心脏摘出。用任氏液屡次冲洗(10~25滴/min的速度缓慢点滴)任氏液。至插管内任氏液完整澄清无色为止。今后做实验注意每次换液时,插管内液面应保持同样的高度。
5、连接多道生理记录仪
①用夹子将蛙心插管固定于铁架台上,肌张力换能器固定于蛙心下方,经过蛙心夹与线将离
体蛙心与张力换能器相连(蛙心夹于心室舒张时夹住心尖)。
②开动多道生理记录仪观察曲线。
6、观察内容
①描记正常心搏曲线:
曲线疏密——代表心跳的频率;
曲线的规律性——代表心跳节律性;
曲线的幅度——代表心室缩短的强弱
曲线的极点水平——代表心室缩短的程度;
曲线的基线——代表心室舒张的程度。
②加入2%CaCl溶液1~2滴,混匀,观察曲线变化。
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③加入1%KCl溶液1~2滴,混匀,观察曲线变化。
④加入1/10000Ad溶液1~2滴,混匀,观察曲线变化,待效应显而后,将灌溉液所有吸出,换入新鲜任氏液,使心跳恢复正常。
⑤加入1/100000Ach溶液1~2滴,混匀,观察曲线变化,待效应显而后,将灌溉液所有吸出,
换入新鲜任氏液(假如加入Ach后心跳已停止舒张状态,换液后,可用滴管插至插管底部,将灌溉液剂入心室,屡次数次,将心室内Ach完整冲洗出)。
注意事项
1、用眼科镊提起心包膜,再用眼科剪在心脏缩短时将其剪破,使心脏完整裸露出来。
2、未结扎剪断血管会造成大出血,是严重错误操作;未结扎便插入插管同理。
3、为了使蛙心插管顺利插入心室,应使心室与动脉圆锥成一条直线。
4、进入心室的标记是跟着心室搏动,均有血液喷入插管
5、在蛙心插管插入心室后,用吸管及时吸出管内的血液,更换新鲜任氏液