文档介绍：细菌室操作规程
痰液培养
1、痰涂片,根据需要分别做革兰氏染,抗酸染色等。
2、将痰加入盛有15-20ml灭菌生理盐水的试管中,剧烈振荡5-10秒,然用接种环将沉淀于管底的脓痰小片沾出,再放入另一试管内,以同样的方法反复二次,最后剩余的脓痰接种在培养基上。
3、对可疑病原菌,应做涂片镜检,鉴定及药物敏感试验。
4、检出致病菌时,应报告:草绿色链球菌(+~++++)、
奈瑟菌(+~++++)、致病菌名称:×××
5、未检出致病菌时,应报告:正常菌群。
尿液培养
1、用5-25μl加样器,加消毒后的无菌吸咀,吸尿液5μl滴注在血平板上,用接种环涂抹,待表面干燥后,35℃培养过夜,计数生长菌落数,结果乘以200,求出每ml的细菌总数(cfu/ml)。
2、对革兰氏阴性杆菌菌落计数小于105 cfu/ml,革兰氏阳性球菌计数小于104 cfu/ml,结果报告:细菌培养阴性。
3、对革兰氏阴性杆菌菌落计数大于105 cfu/ml,革兰氏阳性球菌计数大于104 cfu/ml有诊断意义,,应对细菌进行鉴定及药敏试验。
血液及骨髓培养
1、无菌操作静脉取血5ml,,混匀后置烛缸内孵育;剩余血液注入普通培养瓶,置35℃温箱孵育。
2、血培养瓶和培养管经48小时35℃孵育后,在血平板或巧克力平板上盲目传种一次。
3、盲目传种后,培养瓶和培养管继续孵育至7天每日早晨取出检查有无生长,并摇匀培养液继续孵育。
4、肉眼见有细菌生长时应取生长物移种血平板,巧克力平板进行分
离以获得纯培养,同时取生长物做革兰氏染色,将革兰氏染色结果,电话通知临床医师。标本经平板分离纯培养后,做鉴定和药敏试验。正式报告细菌名称和药敏结果。
粪便标本培养
1、按需要进行涂片,做不同的镜检和染色
2、接种SS平板及麦康凯或伊红美兰平板,
3、未发现沙门菌或志贺菌的可疑菌落,可报告:未检出志贺菌和沙门氏菌。
4、对疑似该两种细菌的菌落且同志贺菌诊断血清之一发生明显凝集者,可报告:“检出XX志贺菌”并报出药敏结果;与沙门菌多价群因子诊断血清发生明显凝集者可报告:“检出XX群沙门菌”并报出药敏结果。
5、对疑似其他致病菌的菌落也做鉴定和药敏试验并报告。
分泌物培养
1、对临床送检的分泌物标本,分别接种血平板及肉汤增菌,并取分泌物涂片且对涂片结果记录。
2、对血平板培养出的细菌进行鉴定和药敏试验并报告
3、当血平板未培养出细菌时,应对增菌肉汤进行转种血平板,对血平板培养出的细菌进行鉴定和药敏试验并报告,对血平板未能培养出细菌时应报告:无细菌生长。
细菌的鉴定程序
革兰氏阳性球菌
革兰氏阴性杆菌
链球菌接种氧化/发酵管
接种肠杆菌生化管肠球菌按肠杆菌科编码系统鉴定葡萄球菌微球菌
接种葡萄球菌生化管接种非发酵菌生化管弧菌
按非发酵革兰氏阴性气单胞菌
杆菌编码系统鉴定邻单胞菌
凝固酶阴性葡萄球菌
洋葱假单胞菌肠杆菌科嗜麦芽寡源单胞菌
不动杆菌属
TORCH-IgM四联筛检
本实验可用于血清或血浆标本的检测,标本以新鲜为宜。末稍血可室温下稳定2天,血清和血浆在2-8℃可储存五天。存放在-20℃下稳定2天,血清和血浆在2-8℃可储存5天。存放在-20℃下的血清可延长储存时间。最好不用长期、反复冷冻的血清,如确需使用,请务必先离心(
10000gx10min),取上清液检测。
(检测)步骤:
,室温放置5-10分钟
,在中央孔加A液200微升,待渗入。
,待渗入。
液100微升(2滴),待渗入。
(4滴),待渗入。
液150微升(3滴),然后直接观察结果。
三. 结果判断:
阴性:仅质控点出现红色斑点为阴性反应。
阳性:除质控点出现红色斑点外,四角的检测点也有红色或浅红色斑点出现。
哪一个检测点出现红色斑点即为相应的IgM抗体阳性。如左上角检测点出现红斑点即为弓形体IgM 抗体阳性;左上角和右下角检测点同时出现红斑点即为弓形体HSV2IgM抗体阳性,依次类推。
四. 结果解释
阴性:说明标本不含相应抗体滴度很低。患者对初次感染会是敏
感的。
阳性:阳性结果表明有相应IgM抗体存在,提示当前感染,但需
结合临床和其他检查综合判断,应由临床医生根据病人临床症状分析判断,病人不可自行诊断。
解脲支原体检测
一、试剂
1、解脲支原体培养基(ureaplasma urealyticum medium)
2、溶液A: