文档介绍：蛋白质(酶)的分离与纯化
第一节引言
蛋白质(酶)、核酸存在于一切生物体中,是非常重要的生物大分子。蛋白质(酶)是生物功能的执行者,担负着生物催化、物质运输、运动、防御、调控及记忆、识别等多种生理功能;
核酸是遗传信息的携带者,在生物体中指导各种蛋白质(酶)的合成。
DNA
RNA
Protein
蛋白质的分子量一般在10000~1000000 Da之间
1 Da=1×C12绝对质量/12
≈×10-27 kg
一、分离纯化的意义
1 从生物材料中分离制备蛋白质(酶),研究其结构与功能,对于了解生命活动的规律,阐明生命现象的本质有重大意义。
2 工业生产的需要:食品、发酵、纺织、制革等工业,需要大量的高活性的酶制剂。如用淀粉酶制造葡萄糖、麦芽糖、糊精以及糖浆等。
3 医疗的需要:如用猪胰岛素治疗糖尿病。
4 基因工程的需要
蛋白质组学实验室所需的条件
蛋白质组研究相关网站
.com 蛋白质组研究技术、信息等
蛋白及新作用(新药开发)
蛋白质组研究相关企业、各种仪器来源、新闻等
各种蛋白质组研究相关信息
介绍蛋白质鉴定的先进仪器
鉴定专家系统,Swiss Institute of Bioinformatics
http://expasy..au 蛋白质鉴定专家系统,Australian Proteome Analysis Facility
蛋白质鉴定专家系统,Canadian Bioinformatics Resours
二、分离纯化的要求
1 纯度:主要取决于研究的目的和应用上的要求。如作为研究蛋白质(酶)一级结构、空间结构,一级结构与功能的关系、工具酶和标准蛋白、分析用酶制剂,都要求均一;工业、医药方面应用的酶和蛋白质制剂,达到一定纯度即可,不要求均一。
2 活性:要求大分子保持天然构象状态,有高度的生物活性。
3 收率:希望收率越高越好,但在分离纯化过程中总有不少损失。而且提纯步骤越多,损失越大。
4 在制备时丢失的蛋白(酶)永远不能在后面实验中弥补。
所有待分析的蛋白样品全部处于溶解状态
防止样品在聚焦时发生蛋白的聚集和沉淀
防止在样品制备过程中发生的化学修饰(如酶性或化学性降解等)
去除样品中的核酸和某些干扰蛋白等杂质
三、分离纯化的原则
四、分离纯化的一般程序
分离纯化一般可分为以下几个阶段:
①材料的选择和预处理
②破碎细胞及提取(有时还需要进行细胞器的分离)
③分离纯化:包括粗分级分离和细分级分离其中前两个阶段为生物大分子分离纯化的前处理。
第二节分离纯化的前处理
选择材料主要根据实验目的而定。工业上通常选择含量高、来源丰富、易获得、制备工艺简单、成本低的动植物组织或微生物做原料。科研选材则无需考虑上述问题,只要能达到实验目的即可。
实验材料选定后,常常需要进行预处理,如动物材料需要除去一些与实验无关的结缔组织、脂肪组织;植物种子需要除壳;微生物需要将菌体与发酵液分开。另外,必须尽可能保持材料的新鲜,尽快加工处理。若不立即进行实验或加工,应冷冻保存。