文档介绍：色谱柱清洗及保存方法
1、尺寸排阻色谱柱:
(1) 树脂基质分子尺寸排阻色谱柱
①离子性吸附:对于阳离子性吸附物质,通过提高盐浓度进行过柱清洗
(1mol/L的醋酸缓冲液)
②疏水性吸附:对于疏水性吸附物质,可通过提高有机溶剂的浓度
(PW·PWXL:50%、α及SuperAW:100%可)进行过柱清洗。
③复合吸附:对于阳离子性·疏水性物质的去除,可提高盐浓度进行过柱,
水洗后,提高有机溶剂浓度进行过柱。
(2)硅胶基质分子尺寸排阻色谱柱
①碱性物质的去除(离子性吸附):通过提高淋洗液的盐浓度(通常
)进行过柱清洗。
②疏水性吸附的去除(疏水性吸附):在淋洗液中添加甲醇、乙***(10-20%)
等水溶性有机溶剂进行过柱清洗。本法请注意缓冲液中盐的析出。
③在淋洗液中添加尿素、中性界面活性剂:在淋洗液中添加6-8mol/L的
-%的中性界面;活性剂(Triton、Tween、Brij等)后进
行过柱清洗。但需注意尿素及界面活性剂的柱中残留。
一般来说,清洗时间可选择为过柱5-10个柱体积便可。
2、离子交换色谱柱、
(1)如果预柱滤片或保护柱在分离之前曾经使用过,需要首先将预柱滤片或
保护柱反接用清洗溶液冲洗15-30min。如果经过冲洗效果没有得到明显改善,则需要更换预柱滤片或保护柱。对于Proteomix阴离子交换色谱柱,清洗溶液为含150mM***钾的75%乙***溶液(用HCl调节pH至2)。对于Proteomix阳离子交换色谱柱, NaCl的50mM磷酸盐缓冲液(pH10)。
(2)在使用过程中,样品经常会被吸附在柱入口端的筛板或者填料上。
当样品吸附累积到一定程度时,柱压将会升高,色谱峰形也会出现展宽。这时就需要清洗色谱柱了。
下面是色谱柱清洗的基本步骤:
①将色谱柱与检测器断开;
②将色谱柱反接后进行冲洗;
③将流速设置到所推荐的最大流速的50%进行冲洗。注意柱压的变化。如
果柱压超出正常水平许多,则需要降低流速,或选用低粘度的清洗溶液; ④通常10-15倍柱体积的清洗溶液就足够了。下面将介绍可供选择的清洗
溶液。低pH的盐溶液有助于去除碱性蛋白。高pH的盐溶液有助于去
除酸性蛋白。有机溶剂可去除疏水蛋白。这里推荐两种常用的清洗溶液:
对于Proteomix阴离子交换色谱柱,清洗溶液为含150mM***钾的75%