文档介绍：酶工程实验——大蒜细胞SOD的提取、SOD活力测定
实验四、五大蒜细胞SOD的提取、SOD活力测定
一. 实验目的
学习超氧化物歧化酶的提取与分离方法
二. 实验原理
超氧化物歧化酶(SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧
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负离子(O2)进行歧化反应,生成氧和过氧化氢:2O2+H2==O2+H2O2。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD,通过组织或细胞破碎后,。由于SOD不溶于丙酮,可用丙酮将其沉淀析出。
三. 实验方法及步骤

称取5g左右大蒜蒜瓣或大蒜细胞,置于研磨器中研磨,使组织或细胞破碎。
将上述破碎的组织或细胞,加入2-,,继续研磨搅拌20min,使SOD充分溶解到缓冲液中,然后用离心机在5000rpm,离心15min,弃沉淀,得提取液。
-乙醇混合溶剂搅拌15min,5000rpm离心15min,去杂蛋白沉淀,得粗酶液。

将上述粗酶液加入等体积的冷丙酮,搅拌15min,5000rpm离心15min,得SOD沉淀。
,,于55-60℃热15min,离心弃沉淀,得到SOD酶液。
将上述提取液、粗酶液和酶液分别取样,测定各自的SOD活力。
取3根小试管,按下表分别加进各种试剂和样品液。
(ml)
在加入肾上腺素前,充分摇匀并在30℃水浴中预热5min至恒温。加入肾上腺素(空白管不加),继续保温反应2min,然后立即测定各管在480nm处的光密度。对照管与样品管的光密度值分别为A和B。
在上述条件下,SOD抑制肾上腺素自氧化的50%所需的酶量定义为一个酶活力单位。即: 酶活力(单位)=2·(A-B)·N/A 式中 N――样品稀释倍