文档介绍：枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶发酵的研究
(董祖明生物工程091 指导老师: 焦扬老师)
(农业与生物技术学院,甘肃张掖 734000)
摘要:对枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶的培养基成分及培养条件进行优化,在单因素基础上通过正交实验确定发酵培养基各成分最佳配比,采用优化培养基对发酵菌株的培养条件进行单因素实验。结果表明:最佳发酵培养基为:葡萄糖 10 g/l、麦芽糊精 20g/l、柠檬酸钠 3 g/l 、CaCl2 3g/l、KH2PO 10g/l、FeSO4
最适发酵条件为: %、装液量50 mL/ 250 mL、%、32℃,发酵36h,
关键词:枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶发酵培养基
引言:碱性蛋白酶是指在pH值为碱性的条件下水解蛋白质肽键的酶类,其最适pH值一般为9~11,属内肽酶中的丝氨酸蛋白水解酶类,除可催化蛋白质水解为氨基酸外,在有机溶剂中还可催化多肽的合成[1]。它在商业中的巨大应用前景及在基础研究中的重要作用,吸引着国际国内的许多公司及研究单位竞相对其进行多方面的研究[2]。微生物蛋白酶均为胞外酶,与动、植物源蛋白酶相比具有下游技术处理相对简单、价格低廉、来源广、菌体易于培养、产量高、高产菌株选育简单、快速、具有动植物蛋白酶所具有的全部特性,同时易于实现工业化生产[3]。我国研究和生产的碱性蛋白酶的活力水平虽然不断提高,但大多数采用进口的碱性蛋白酶制剂,并且大规模工业生产中用的碱性蛋白酶还是主要依赖进口[4]。枯草芽孢杆菌是生产碱性蛋白酶的传统菌株,具有产蛋白酶量大,耐高温、高碱等特点,因此对枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究成为蛋白酶研究的热点[5]。本研究通过正交试验对枯草芽孢杆菌发酵培养基及培养条件进行优化,以期进一步提高枯草芽孢杆菌所产碱性蛋白酶粗酶的活力。
1 材料与方法
材料
菌种: 枯草芽孢杆菌(发酵试验室培养)
试剂: 酪氨酸福林试剂 ***乙酸 (PH )
培养基
种子培养基: 胰蛋白胨 5g/l 酵母浸粉5g/l 葡萄糖 10g/l KH2PO4 18g/l
121℃蒸气灭菌20min。
摇瓶培养基:酵母浸粉 g/l 麦芽糊精 5 g/l 柠檬酸钠 g/l
KCl g/l CaCl2 g/l K2HPO4 g/l pH 值自然,121℃蒸气灭菌20min。
发酵培养基:葡萄糖 10 g/l麦芽糊精 20g/l柠檬酸钠 3 g/l CaCl2 3g/l KH2PO 10g/l FeSO4 PH 值自然,121℃蒸气灭菌20min。
器材:自动式发酵罐高压灭菌锅超净工作台电热恒温水浴锅
低温离心机分光光度计 PH计
方法
碱性蛋白酶活力的测定
取碱性蛋白酶菌种发酵液于离心管内,4000r/min离心20min取上清液,采用Folin 酚法测定碱性蛋白酶活力酶活力[5]。
酶活力单位定义为:在温度55℃ 的条件下,1min 水解酪素产生1μg 酪氨酸所需酶量定义为1 个酶活力