文档介绍：山东师范大学
硕士学位论文
重组人粒细胞集落刺激因子的长效性改造
姓名:傅一鸣
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:安利国;王清明
20080420
⋯字:桫玛一枷闪他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得——�ⅲ喝�,遐�辍卧耭日学位论文作者签名:能一一喝学位论文版权使用授权书独创声明本学位论文作者完全了解堂撞有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向权堂撞可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用签字日期:��┠瓿г隆烊�本人声明所呈交的学位论文是本人在导��乐傅枷陆�械难芯抗ぷ骷叭〉玫�研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其没有其他需要特别声明的,本栏可空�蚱渌�逃��沟难�换蛑な槭褂霉�牟�料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。�C艿难�宦畚脑诮饷芎�适用本授权书�导师签字:签字日期:��‘�’
重组人粒细胞集落刺激因子的长效性改造摘要基因。将���镆约翱赵靥錺���直鹩闷ㄡ釯和度斓��盖校�缓螅���人粒细胞集落刺激因子����—��是一种定向作用于粒系祖细胞的造血生长因子。它作用于粒系祖细胞,可以特异刺激祖细胞向中性粒细胞增殖分化,并维持其功能和存活【�俊A俅采现�要用于骨髓移植时促进中性白细胞增加、癌症化疗引起的严重中性粒细胞缺乏症。但是�狢�的半衰期短,临床治疗应用时需反复使用才能维持有效的血药浓度,这导致病人的治疗费用高,病人的依从性差。本课题的目的是利用融合蛋白的方法,构建具有更长半衰期的新型�狢�,以取代普通的�狢�。根据文献报道,有一种从噬菌体肽库中筛选出来十肽能够特异结合人工�的�段����=ū嗦氪诵‰牡幕�蛴肴薌—���蛉诤先诤希�菇╮�—��融合蛋白��—��猼��基因。首先,设计引物,以��狢�表达载体��狦—��D0澹��蠵�反应,扩增����嗦肭��癈一末端融合有多肽基因��狢�融合蛋白��—��猼��切产物连接构建出原核表达载体�卜�狢�和��狢�—��。经双酶切鉴定、���ḿ靶蛄胁舛ǎ�砻髁礁鲋刈橹柿V械哪康幕�蛐蛄姓�贰�将阳性重组质粒转化大肠杆菌表达菌������嫣跫�屡嘌鴕�—�����狢�—��工程菌,�℃温度诱导目的蛋白的表达,并对目的蛋白在菌体内的表达形式进行分析。��狿��峁�允荆�攵哉站�啾龋�露扔盏己蟮闹刈�菌在分子量为�—���τ心康牡鞍妆泶铩=�徊绞笛榉治霰砻鳎�诘眔�璐�到��~��时,升温至�℃温度诱导表达�,目的蛋白质的表达量最大,并且表达的目的蛋白主要以包涵体形式存在。将��狢�和��狢�—��包涵体用各种不同的缓冲液进行洗涤,可以去除一些杂蛋白,然后用尿素和盐酸胍裂解包涵体,�嫱肝龈葱裕�葱院蟮哪勘�蛋白用��阴离子交换柱进行纯化,收集目的蛋白质洗脱峰,得到纯化的目的蛋白。将目的蛋白用��—����甇�撼逡和肝觯��蠡晃狧�—����.�������山东师范大学硕士学位论文������,
中图分类号:��缓冲液继续透析。用�狢�依赖株细胞株����赴��衦�—��蛂�—��猼��奶逋饣�性测定。��ḿ觳獗砻鳎瑀�—��蛂�—�����芪�諲�一�细胞的存活与增殖。用牛血清白蛋白作为标准蛋白绘制标准蛋白曲线,测出�������狢���的蛋白浓度。最后,采用��周龄��/�∈螅��⒒�坪蟀紫�胞低下小鼠模型,构建成功后,分为阴性对照组、����瘟谱楹蛂�—����组,分别注射���姿嵫位撼逡骸��—��蛂�—����。然后,每天对各组小鼠的白细胞进行计数。结果成功构建了��狢�和��瓹�—��表达载体,实现了其在大肠杆菌中高效表达。体外活性测定表明,复性后的��狢�和��狢�—��均能有效刺激�狢�依赖细胞株����赴�拇婊钣朐鲋场6�锸笛楸砻鳎�诤系鞍���狢�—��具有比��狢�更长的体内活性,这表明,��狢�—��在体内具有比��狢�更长的半衰期。关键词:人粒细胞集落刺激因子,半衰期,长效山东师范大学硕士学位论文�
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