文档介绍：SIGMA 葡萄糖HK检测试剂盒说明书
SIGMA葡萄糖HK检测试剂盒说明书
(Glucose (HK) Assay Kit; Product Code GAHK-20)
一、产品介绍
食品、生化和制药业普遍将酶作为分析工具。酶法具有特异性高、重现性好、敏感性高以及反应快速的特点,是用于分析的理想工具。由于酶具有高的特异性和敏感性,所以不需样品制备即可进行定量分析。本试剂盒以酶法定量测定食品和其他材料中的葡萄糖。原理:
葡萄糖+ATP 6-磷酸葡萄糖+ADP
G6P+NAD 6-磷酸葡萄糖酸+NADH
葡萄糖在己糖激酶催化反应中被ATP磷酸化,然后G6P在NAD存在下被6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化,氧化为6-磷酸葡萄糖酸;反应中,等分子量的NAD被还原为NADH。随后的340nm吸光度的增加与葡萄糖含量成正比。
二、试剂组成
1、葡萄糖检测试剂
用20ml水溶解小瓶内粉剂;加水后立即盖紧瓶塞,反转混匀数次,不可震动。
加水20ml溶解后, mM NAD, mM ATP, U/ml G6PDH;并含有防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾。
小瓶粉剂保存于2-8℃。如果粉剂受潮结块、加水不能充分溶解、或
水溶液浑浊,则应将试剂弃用。
试剂水溶液比较稳定,18-26℃保存7天、2-8度保存4周不会有微生物生长。以水作为空白参照,,则溶液不适合使用。
2、葡萄糖标准溶液
D-葡萄糖,%苯甲酸;该标准液为即用型,符合美国国家标准技术研究所标准;2-8℃可至少保存半年。期间如果溶液浑浊,则应弃用。
三、需自备的实验仪器
1、可测定340nm吸光度的分光光度计
2、测量杯
3、10μl-1ml量程的移液器
四、注意事项和免责声明
本试剂仅供科研使用,不能用于药品、家庭以及其他用途。涉及危害和使用安全性问题,参照材料安全数据表。
五、存储及稳定性
2-8℃保存。
六、实验步骤
1、样品制备
液体:-5mg葡萄糖/ml。可过滤或去蛋白处理使样品澄清;样品葡萄糖含量较低而颜色较浓时,应予以脱色处理。含碳酸或发酵样品,须脱气处理。固体:,用去离子水
提取样品。可以加温溶液(<75℃)以助提取。-5mg葡萄糖/ml。可过滤或去蛋白处理使样品澄清。
2、测定
-50μg葡萄糖质量相当的溶液。-,必要时可重复测定并G6PDHHexokinase
改变溶液体积。
(2)混匀,室温(18-35℃)孵育15min
(3)去离子水调零,测量340nm吸光度,
总空白对照应包括样品和试剂空白。
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