lipofectamine转染说明.pdf

文档介绍：该【lipofectamine转染说明 】是由【我是开始】上传分享，文档一共【3】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【lipofectamine转染说明 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。L i p o f e c t a m i n e
2 0 0 0 转 染 说 明
-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1
LipofectamineTM 2000
CAT. NO. 11668-027 Size:
CAT. NO. 11668-019 Size: ml
4 ℃储存（不要冻存）
说明：
LipofectaminTM 2000 是核酸（DNA 或 RNA）转染真核细胞的一个专用的试
剂盒，其有如下优点：
对各种细胞及细胞板（如 96 孔板）都有高的转染效率，在 的细胞系数据库
中有各种细胞转染成功的实例。
在含有或是不含有血清的培养基中，DNA- LipofectaminTM 2000 复合物能够
直接加给细胞。
在转染之后不需要除去复合物以及添加或是更换培养液，但在培养 4-6 小时
后需要除去复合物。

关于转染的一些重要建议：
1. 不要用即将要介绍的转染程序进行 RNAi 的转染实验。在上有转染步
骤，登陆后点击说明。
2. 对于大多数细胞系，转染复合物中 DNA(μg)与 LipofectamineTM 2000(μl)
的比例在 1：2 到 1：3 之间，最好达到最优化的比例。注意：在混合之
前，我们建议用 Opti-MEM I 低血清培养基（Cat: ）（reduced serum
medium）稀释 LipofectamineTM 2000 和 DNA.
3. 为了实现高的转染效率、高的目的基因表达水平以及低水平细胞毒效
应，受体细胞最好达到高的浓度：在转染时，细胞的培养液的混浊度建
议为 90%-95%并最优化混浊度。此外，在实验过程中保证相同的接种条
件。
4. 为避免细胞死亡，在培养基中不要加抗生素。
5. 由于一些无血清复合物（如 CD239、SFM II、VP-SFM）会抑制阳离子脂
质体介导的转染，因此有必要检测一下无血清培养基和 LipofectamineTM
2000 的相容性。

转染步骤（用于 DNA）：
按照如下步骤在 24 孔板中转染哺乳动物细胞。对于其它种类细胞板请参照
转染量度标准。步骤中均按照一个细胞孔的量给出质量和体积。
1. 贴壁细胞：转染的前一天，在 500μl 无抗生素培养基中接种×105 个细胞，
以保证在转染时候细胞的混浊度达到 90%-95%。
悬浮细胞：在准备转染混合物时，每 500μl 无抗生素培养基中含有细胞数量
为 4-8×105。
2. 对于每个转染样品，按下面的方法准备：
a、 在 50μl 无血清 Opti-MEM I 低血清培养基中（或是其它无血清培养基）
稀释 DNA，并轻轻混匀。
b、 使用前轻轻混匀 LipofectamineTM 2000，然后取相应的量稀释在
Opti-MEM 培养基中。室温下静置 5 分钟。注意：要在 30 分钟内混合
LipofectamineTM 2000 和 DNA 的稀释液。
2
c、 室温下静置 5 分钟后，混合 LipofectamineTM 2000 和 DNA 的稀释液（总
体积为 100μl）。轻轻混匀并在室温下静置 20 分钟（溶液混合后可能会
看上去浑浊）。注意：混合物在室温下的 6 个小时内不会失效。
3. 细胞板的每个孔中加混合液 100μl，并前后轻轻摇动细胞板使混合液与孔中
的培养液混匀。
检测目的基因的表达情况前，细胞于 ℃ 培养箱中培养 小时。
4. 37 CO2 18-48
此时不需要改变培养基，但 4-6 小时后也许需要更换.
5. 对于固定的细胞系：转染 24 小时后将细胞以 1：10（或更高的稀释度）稀
释度转移到新鲜的生长培养基中。如果需要的话，在以后的培养中可以在
培养基中加入选择培养基。
对于悬浮的细胞系：转染 4 小时后，如果需要，加入 PMA 和/或 PHA 以提
高 CVM 启动子的活性并促进基因表达。


转染量度标准：
在不同的组织培养板中转染细胞时，根据相对的表面积，按比例加入
LipofectamineTM 2000、细胞、和培养基，具体情况剪下表。在自动、高产率体
系中，建议 96 孔板的转染混合物的体积为 50μl。注意:操作时，可以直接将细
胞混入转染混合物中进行快速的 96 孔板转染。在细胞板中准备好转染混合物，
然后直接加入说明中正常 100μl 体积时浓度的 2 倍浓度细胞培养液。在转染混
合液存在情况下，细胞可以正常的贴壁。

培养容器 每个孔的表 相对于 24 铺板培养 DNA(μg)/培养 LipofectamineTM
面积 孔板的表面 基体积 基（μl） 2000（μl）/培养
（cm2） 积 基（μl）
96 孔板 100μl μg/25μl μl/25μl
24 孔板 2 1 500μl μg/50μl μl/50μl
12 孔板 4 2 1ml μg/100μl μl/100μl
35mm 板 10 5 2ml μg/250μl 10μl/250μl
6 孔板 10 5 2ml μg/250μl 10μl/250μl
60 mm 板 20 10 5ml μg/ 20μl/
10cm 板 60 30 15ml 24μg/ 60μl/
注意：表面积是根据培养容器的实际测量得到，但也会根据容器生产商的不同
发生变化。

优化转染：
为了得到高的转染效率和低的无用副效应，通过改变细胞浓度、DNA 以及
LipofectamineTM 2000 的浓度来优化转染条件。另外，要保证细胞培养基的细胞
混浊度高于 90%，DNA(μg)与 LipofectamineTM（μl ）2000 的比在例 1：到 1：5
之间。
3