文档介绍：第五章细胞融合与杂交
脾细胞
(B淋巴细胞)
骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
长命
不分泌抗体
分泌抗体
短命
分泌抗体
长命
Köhler和Milstein, 1975
1984年Nobel医学奖
一、细胞融合的概念和目的
细胞融合:自然或人为条件下,两个或两个以上细胞相互接触,发生膜融合、胞质融合和核融合形成融合细胞的现象。
目的:获得杂种优势
凝集膜融合质融合核融合
二、细胞融合的一般过程
细胞膜的结构模式图
膜脂的主要运动方式
侧向扩散的频率:106/s
侧向扩散
伸缩震荡
摆动运动
旋转运动
翻转运动
旋转异构化运动
细胞融合关键是膜的融合,而膜融合的关键是相邻的膜脂不稳定。
中文名称:聚乙二醇
用于细胞融合的分子量:1000-6000
使用浓度:30-60%。
PEG的处理时间:时间较短
PEG分子量和浓度越大,其融合率越高,但它的细胞毒性和粘度也随之增大。
三、PEG的性质
四、PEG促融合作用机理
1、PEG含有大量醚键,可吸附溶液中大量的自由水,使细胞凝集。
2、PEG可使细胞膜的脂类分子发生重排,排开膜蛋白,并作用于膜磷脂极性基团和细胞膜表面蛋白,使膜磷脂的表面电位下降,同时使膜糖蛋白的排阻体积减少,最终使膜出现缺口。
1)亲本细胞混合,1000rpm,10min离心,弃上清。
2)轻扣管底,混匀细胞, 37℃水浴。
3) 50%PEG,边滴边摇动试管,
3)30s内将细胞悬液吸入吸管静置30s,再在30s内缓慢转入离心管。
4)5min内加入10mlDMEM逐渐终止PEG的作用。
五、PEG诱导细胞融合的方法
播放操作视频
PEG诱导细胞融合的特点:
1、价格低廉,操作方便,融合能力强。
2、有毒,易损伤细胞。