文档介绍：植物组织培养
陈勇
一、实验室设计、基本设备及操作技术
二、培养基的成分及作用
三、培养基的制备
概念:本世纪初开始,以植物生理学为基础发展起来的一项技术。即应用无菌操作方法,培养植物的一个离体器官、组织或细胞。
这项技术已在快速繁殖、去除病毒、加速育种进程、次生代谢产物生产和种质资源的保存等方面取得了巨大的经济效益、社会效益及生态效益。
根芽形成的激素控制理论:
细胞分裂素与生长素的比例与绝对含量,调控着植物组织的形态发生及细胞分化,当比值高时产生芽,低时产生根,比值适中时可能维持原组织生长而不分化。
植物组织培养的优点
1. 研究材料来源单一,无性系遗传背景一致
2 . 经济方便效率高
3 . 条件可控误差小
4. 生长快周期短重复性强
5 . 周年试验或生产
一、实验室设计、基本设备及操作技术
快速繁殖的几道主要工序:
培养器皿的清洗;培养基的配置、分装、包扎和高压灭菌;无菌操作——材料的表面灭菌和接种;放入培养室培养;试管苗的种植与初期管理。
(一)实验室设计与要求
房屋可划分为准备室、培养室、无菌操作室等。
1. 准备室
20m2左右:完成器皿洗涤、培养基配制、分装、包扎、高压灭菌等环节。
主要设备及用具:
电冰箱、高压灭菌锅、电炉或煤气炉、不锈钢锅、水槽、大型工作台、玻璃橱、干燥箱、蒸馏水发生器或无离子发生器、酸度计或PH计、托盘天平、电子天平或工业天平、培养器皿、下口杯、试剂瓶、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、洗瓶、手套、塑料篮等。
2. 无菌操作室(接种室)
是进行无菌工作的场所,如材料的消毒接种、无菌材料的继代。是植物组织培养研究或生产工作中的最关键的部分。
主要设备是超净工作台:其优点是操作方便自如,比较舒适,工作效率高,预备时间短,开机10分钟以上即可操作。
无菌室需安装紫外灭菌灯,定期用70%酒精或其他灭菌手段消毒。
无菌室内还需有小搁架、医用小平车、无菌操作用器具、小白瓷圆碟、适当大小的烧杯或广口瓶、常备的消毒灭菌药、毛刷、无菌水等。…
3. 培养室
尽量安排在楼层较高处,以利采光、减少尘埃和杂菌污染的机会;还应清洁、干燥、保温隔热、尽量利用自然光照等措施。
主要设备与用具:培养架与灯光、配电板、时控器、空调机、控温仪、温度湿度计、温度自动记录仪、最高最低温度计等仪器。
(二)操作技术
1. 洗涤
培养过程中最经常最大量的工作之一,是洗涤培养瓶及其它常用器皿。
最常用的洗涤助剂就是家庭用的洗衣粉及肥皂。
2. 灭菌
有菌的范畴:
凡是暴露在空气中的物体,曾经接触过自然水源的物体,至少它的表面,毫无例外都是有菌的。
无菌的范畴:
经过高温灼烧或蒸煮过后的物体,经其他物理的或化学灭菌方法处理过后的物体,是无菌的。