文档介绍：血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)
第六小组
关于丙氨酸氨基转移酶ALT
转氨基作用
指的是一种α-氨基酸的α-氨基转移到一种α-***酸上的过程。转氨基作用是氨基酸脱氨基作用的一种途径。其实可以看成是氨基酸的氨基与α-***酸的***基进行了交换。
谷丙转氨酶
谷丙转氨酶是临床上进行肝功能测试的一个标准,来确定肝脏是否健康。它也被叫做血清谷氨酸***酸转氨酶(serum glutamate pyruvate transaminase,简称SGPT)或丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,简称ALAT)。诊断上,基本上都是以“单位每升”(U/L)为单位进行测量。
什么是改良赖氏法?
卡门法
***酸+α-***戊二酸
谷氨酸+丙氨酸
***酸→NAD++乳酸
在紫外分光光度法中,NADH在340nm波长处的吸光度降低值与ALT活性成正比。
卡门氏酶单位:1ml血清(反应溶液总量为3ml)在340nm波长下,,在25摄氏度,1分钟内生成的***酸,在乳酸脱氢酶催化下,使NADH+H+变成NAD+,。
赖氏法
改变了***酸含量的测定方法
***酸+2,4-二硝基苯肼
***酸2,4 -二硝基苯腙+H2O
改良赖氏法
赖氏法的测定方法+卡门氏法的酶单位定义
实验目的
(改良赖氏法)和临床意义
实验原理
在实验条件下,以丙氨酸和α- ***戊二酸作为第底物,经转氨酶的作用,生成谷氨酸和***酸,然后测定***酸的生成量,即可计算酶活性的大小
实验原理
生成的***酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应,生成***酸-2,4-二硝基苯腙,进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物,其颜色的深浅在一定范围内与***酸的生成量,亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的***酸标准液相比较,便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。
实验原理
实验原理
尽管基质液中余下的a-***戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果,但因其量不多,加之对505nm的吸光度远不如***酸生成的苯腙硝醌化合物强,尤其用标准曲线作测定时,所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正,摈弃了赖氏法一些固有弊端,结果比其他比色法准确。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理,全国肝炎协作会议也建议统一使用改良赖氏法。
实验试剂
:称取分析纯α-***,,置于干净小烧杯内,先用50ml碳酸缓冲液(pH=)溶解,然后用1mol/(),,加***仿数滴,防止变质。
=(PBS):称取磷酸氢二钠(Na2HPO4)(KH2PO4)
3.***酸标准液(2mmol/L):准确称取干燥至恒重的***酸钠22mg,以磷酸缓冲液洗入100ml容量瓶中,混合,再以磷酸缓冲液稀释至刻度。本液应新鲜配制。
4. 2,4-二硝基苯肼溶液(1mol/L):称取2,4- ,溶解后,加水至100ml。