文档介绍：高效液相色谱柱的选择
现在高效液相色谱中,分离效果好坏的一个重要指针是色谱填料的选择,但是目前市场上有多种色谱填料可供选择,因此就必须对此有一定的认识和了解。
一、硅胶基质填料
1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其它具有极性官能团,如***基和***基的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其它极性基团极性较强,因此, 分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正己烷,***仿,二***甲烷等。
2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙***等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性较弱的组分在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有C18、C8、C4等。
二、聚合物填料聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚***丙烯酸脂等,其重要优点是在PH值为1-14均可使用。相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效。现有的聚合特填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。
三、其它无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化,由于
其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途。如石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料。这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性。该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强。石墨化碳可用于分离某些几何异构体,由于在HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可以用于HPLC。氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可以在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强,应用范围受到一定限制,所以未能广泛应用。新型色谱氧化锆基质填料也可用于HPLC。商品化的只有聚全物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH1-14,温度可达100℃。由于氧化锆